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Clostridium difficile é um agente patogénico nosocomial que produz esporos associado a diarreia ou colite ligeira a potencialmente fatal (1, 2). C. A colonização difficile aumenta com a duração da estadia hospitalar após exposição ambiental a esporos ou contato com uma pessoa infectada (3). Foram notificados casos de contaminação e sobrevivência de esporos de C. difficile em superfícies hospitalares inanimadas (4, 5) que demonstraram estar associados a transmissão cruzada (6,-8).,a inactivação e erradicação dos esporos de Clostridium difficile são um desafio e várias técnicas relativamente novas foram investigadas, tais como vapor de peróxido de hidrogénio, radiação UV ou sistemas de plasma gasoso. (5, 6, 9, 10). A validação dessas técnicas deve utilizar métodos de recuperação optimizados para quantificar melhor a occisão ou a erradicação do esporo bacteriano.

foi utilizada uma variedade de métodos para detectar C. difficile do ambiente hospitalar com resultados variáveis (11, 12). Aqui relatamos uma avaliação de diferentes métodos para detectar e recuperar C., esporos difficile de materiais comumente encontrados no ambiente hospitalar.(os dados preliminares resultantes deste estudo foram apresentados como cartaz no Congresso Europeu de Microbiologia Clínica e doenças infecciosas, Barcelona, Espanha, Maio de 2014.)

uma estirpe de referência C. difficile, ATCC 700057 (Cruinn Diagnostics, Irlanda) e um isolado clínico não característico (Diagnostic Laboratory, Beaumont Hospital, Dublin, Irlanda) foram incluídos no estudo. A modification of the C. difficile spore preparation protocol described by Chilton et al. foi utilizado (13). Brevemente, C., difficile foi inoculado em prereduced infusão de coração-cérebro suplementado com extrato de levedura e l-cisteína, incubadas anaerobicamente a 37°C por 48 h, e espalhar para 10 Columbia sangue placas de agar (Oxoid, Reino Unido), que foram incubadas anaerobicamente a 37°C por 10 dias (14). O crescimento foi colhido das placas utilizando um raspador de células e suspenso em 1 ml de solução salina tampão fosfato (PBS)–etanol (50% ). As suspensões foram incubadas à temperatura ambiente durante 1 h com mistura periódica., As suspensões de esporos foram centrifugadas durante 10 minutos a 16 000 × g, e os pellets foram ressuspendidos em 1 ml de PBS. O número de esporos e a pureza foram determinados por microscopia utilizando o Kit de coloração de Schaeffer e Fulton spore (Sigma-Aldrich, Irlanda). As suspensões foram ajustadas a uma concentração de aproximadamente 105 UFC / ml (uma colônia é equivalente a um esporo), e diluições série 1:10 foram preparadas em PBS.

C., as suspensões de esporos difficile( 50 µl), que variam entre 105 e 10 ufc/ml, foram adicionadas em duplicado a secções de 25 cm2 de tecido de colchão poliuretano (Meditec Medical, Irlanda), polipropileno (GoodFellow Cambridge, Ltd., Reino Unido) e aços inoxidáveis, todos descontaminados como descrito anteriormente (15). As suspensões de esporos aplicada às superfícies foram secado ao ar mais de 2 h. As superfícies foram obtidas usando premoistened rayon cotonetes e nylon reuniram-cotonetes (Copan, Itália) e colocado em 3 ml de PBS. As diluições em série das suspensões de esfregaço foram inoculadas em placas selectivas C. difficile selective plates-C., difficile agar base CM0601 plus C. difficile supplement SR0096 (250 mg/litro d-ciclosserina, 8 mg/litro cefoxitina) e 7% (vol/vol) de sangue desfibrado de cavalo (SR0050)—fornecido por Oxóide para contagem de UFC/ml. As placas de contacto estéreis (VWR) foram vertidas no laboratório com o ágar selectivo C. difficile e aplicadas a cada secção durante 20 s, garantindo um contacto firme com a superfície. Foram incubadas durante a noite, por via anaeróbia, placas subculturadas de ambos os esfregaços e placas de contacto a 37°C. A contagem de Colónias foi efectuada no dia seguinte., O limite de detecção (LD) foi definido como a menor concentração de esporos aplicada que foi detectada por um método específico. Todos os métodos foram avaliados independentemente visando a seção inteira, e suas habilidades para detectar e recuperar C. esporos difficile foram comparados. A análise estatística foi realizada utilizando o software GraphPad Prism 5.00. Os meios de três experimentos independentes da porcentagem de recuperação para os diferentes métodos foram analisados por análise de Sentido Único da variância (ANOVA) e teste de múltipla comparação de Tukey.,

em 1983, um dos primeiros relatórios comparando métodos para a recuperação de esporos de C. difficile a partir de uma superfície de vidro ambiental mostrou que de esfregaços, pás adesivas e placas de contacto, as placas de contacto eram de longe o método mais eficiente, detectando esporos a baixos níveis, sendo mais simples de usar e relativamente rápido (16). Desde então, vários métodos, incluindo esfregaços, placas de contacto, luvas e esponjas, têm sido utilizados para investigação e investigações de surtos com resultados variáveis. Aqui, demonstramos que as placas de contato alcançaram a maior recuperação de C., esporos difficile (14% a 92%) de várias superfícies, incluindo material para colchões, polipropileno e aço inoxidável, confirmando e ampliando os resultados de Buggy et al. (16) para recuperação a partir de vidro. A recuperação também foi eficiente para esfregaços flocados (14% a 76%), e o método menos eficiente foi o esfregaço de raiom (7% a 58%) (Fig. 1A e andB).B). A percentagem de recuperação foi directamente proporcional ao tamanho do inóculo inicial—ou seja, um inóculo de 105 UFC/ml permitiu que as placas de contacto recuperassem até 92% e até 14% para um inóculo de 10 ufc/ml., As placas de contacto também foram mais sensíveis na detecção de esporos com um inóculo mínimo de 10 ufc/ml, enquanto o LD foi 102 UFC/ml para esfregaços flocados e 103 UFC/ml para esfregaços de rayon, mas isso só foi verdade para o isolado clínico. Estatisticamente, entre em contato placas eram melhores do que os flocados cotonetes em polipropileno para a clínica isolada (P < 0,05) (Tabela 1) e persistentemente superior a rayon cotonetes (P < 0,05 P < 0.001) (Tabela 1), enquanto não houve diferença significativa entre os flocados e rayon cotonetes., Embora a análise estatística não tenha revelado qualquer diferença significativa nas recuperações entre todas as superfícies estudadas, as recuperações do material do colchão foram ligeiramente reduzidas em comparação com as das outras duas superfícies. Além disso, não se observou qualquer diferença estatística entre os dois isolados.