um fragmento variável de cadeia única (scFv) é uma proteína de fusão das regiões variáveis das cadeias pesadas (VH) e leves (VL) das imunoglobulinas, conectada com um peptídeo linker curto de dez a cerca de 25 aminoácidos. O linker é geralmente rico em glicina para flexibilidade, bem como serina ou treonina para solubilidade, e pode conectar o n-terminus da VH com o C-terminus da VL, ou vice-versa., Esta proteína mantém a especificidade da imunoglobulina original, apesar da remoção das regiões constantes e da introdução do linker.
estas moléculas foram criadas para facilitar a visualização de fagias, onde é muito conveniente expressar o domínio de ligação do antigénio como um único péptido. Como alternativa, o scFv pode ser criado diretamente a partir de cadeias pesadas e leves subclonadas derivadas de um hibridoma. ScFvs têm muitos usos, por exemplo, citometria de fluxo, imuno-histoquímica, e como domínios de ligação antigênica de receptores artificiais de células T.,ao contrário dos anticorpos monoclonais, que são frequentemente produzidos em culturas de células de mamíferos, os scFvs são mais frequentemente produzidos em culturas de células bacterianas tais como E. coli
O fragmento de ligação do antigénio (fragmento Fab) é uma região de um anticorpo que se liga a antigénios. É composto por uma constante e um domínio variável de cada uma das cadeias pesadas e leves. Estes domínios formam o paratopo — o antígeno-local de ligação — na extremidade amino terminal do monômero. Os dois domínios variáveis ligam o epítopo em seus antígenos específicos.,
em ambiente experimental, fragmentos Fc e Fab podem ser gerados no laboratório. A enzima papaína pode ser utilizada para clivar um monómero de imunoglobulina em dois fragmentos Fab e um fragmento Fc. A enzima pepsina divide-se abaixo da região da dobradiça, formando-se assim um fragmento F(ab’)2 e um fragmento pFc. O fragmento F (ab’)2 pode ser dividido em dois fragmentos Fab’ por redução ligeira.,
as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves podem ser fundidas para formar um fragmento variável de cadeia única( scFv), que é apenas metade do tamanho do fragmento Fab, mas mantém a especificidade original da imunoglobulina mãe.
A diabody is two scFvs with connected with linker peptides that are too short for the two variable regions to fold together (about five amino acids), forcing the scFvs to dimerize. Foi demonstrado que os Diabodies têm constantes de dissociação até 40 vezes mais baixas do que os SCFV correspondentes, o que significa que têm uma afinidade muito maior com o seu alvo.,
dois scfv’s (que se ligam aos mesmos antigénios ou antigénios diferentes) também podem estar ligados a linkers mais longos, como os fechos de leucina.