Ved HLR-Louisville til 1. juli 2014 | 6:06 pm | Print
UKJENT LAB-RAPPORT
Ukjent Antall 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Generell Mikrobiologi I
Våren 2014
INNLEDNING
Identifisere og forstå mikroorganismer er viktig av flere grunner er at bakterier er en viktig årsak til menneskelig sykdom og sykdom., Å være i stand til å kurere flere infeksjoner og sykdommer kan gjøres ved å være godt informert om ulike mikroorganismer og hvordan de fungerer i ulike miljøer. Denne studien er å identifisere ukjente bakterier ble gjort ved hjelp av ulike teknikker som brukes i mikrobiologisk laboratorium klasse opp til dette punktet.
MATERIALER OG METODER
En test-rør i suppen inneholder ukjente bakterier som er merket med nummer 105 ble mottatt fra mikrobiologisk lab professor. Et utvalg av prosedyrer læres i mikrobiologi lab klassen ble utført på den ukjente bakterier., Disse testene ble utført som beskrevet i mikrobiologi kurs lab manuell av Mcdonald’, Thoele, Salsgiver, og Gero (1) med mindre annet er angitt.
Den første metoden var nødvendig kvadranten strek metode. Dette ble gjort for å isolere de to ukjente bakterier på et næringsstoff agar plate ved bruk av en inoculating loop, Bunsen-brenner, og buljong. Inkubasjon av denne platen ved romtemperatur ble deretter utført for å forsøke fastsettelse av to separate kolonier., Vekst fra en koloni på denne platen ble deretter testet for sin Gram respons gjennom trinnene av gram-farging ved hjelp av jod, crystal violet, alkohol, og safranin for å finne en enkelt type bakterie. Observasjon under et mikroskop reavealed gram svar på bakterien fra kolonien. Oppført i Tabell 1 er de prosedyrer som er tatt, materialer som er brukt, temperatur inkubering, og spilt inn sine resultater for første bakterien. Inkludert i disse testene er Citrate, Glukose og Laktose gjæring, svovel reduksjon gjennom en Kligler Strykejern test, Urea-test, og Methyl Røde test.,
Nødvendige skritt ble deretter tatt til å utføre en Simmon s Citrate test på den første bakteriell koloni ved hjelp av en inoculating loop sterilisert ved flammen av en Bunsen-brenner til å sette vekst på den grønne agar skrå. Inkubasjon av at røret ble deretter gjort for fem dager i en 35°C-innstilling. Fastsettelse av bakterien bruk av citrate som sin eneste kilde til karbon var grunnen til at bak denne testen.
En Kligler Strykejern testen ble utført ved hjelp av vekst fra første kolonien for å begrense valg av mulige bakterien ved å bestemme sin gjæring evner for Glukose og Laktose., Mediet ble stukket av en flamme sterilisert inoculating nål med bakterievekst på det og inkubert ved 35°C i fem dager.
En Urea-test var den neste testen gjennomført på denne gram-negative koloni. Dette ble gjort ved å røre noen av bakterien i pH-indikator phenol red og urea medium varme sterilisert inoculating loop. Det ble deretter inkubert i en 35°C innstilling for førti-åtte timer. Å oppdage om bakterien kan produsere en syre var hensikten bak denne testen., En Methyl-Rød-test ble også utført på gram-negative bakterier for å avgjøre hvorvidt eller ikke bakterien produsert syre etter gjæring glukose. En flamme sterilisert inoculating loop med bakterievekst på det var rørt rundt røret av protein og glukose MR-VP medium og inkubert ved 35°C i førti-åtte timer. Disse testene ble utført for å bekrefte det endelige resultatet av ukjent gram-negative bakterien.
En annen næringsrik agar plate var stripete i forsøk på å finne en annen av bakterier., Den andre metoden er nødvendig for å isolere den andre bakterien, spesielt en gram-positiv bakterie, ble gjort ved hjelp av en inoculating loop sterilisert ved en Bunsen-brenner flammen til å spre buljong fra den opprinnelige røret på en mannitol salt agar plate som var inkubert ved 35°C i fire dager. Etter ingen vekst dukket det opp en isolert gram-positiv bakterie vekst på skrå i et reagensglass merket Alt 8 ble mottatt fra laboratoriet instruktør. Prøvene ble deretter utført på det., Oppført i Tabell 2 er tester som er utført, materialer som er brukt, temperatur inkubering, og spilt inn sine resultater for andre bakterien. Kasein test og en Matlose testen ble utført.
Den første fremgangsmåten som kreves på denne veksten ble en gramfarging. Crystal violet, jod, alkohol, og safranin ble brukt. Bakterien er gram svar ble testet for å begrense valgene for hva dette er ukjent kan være.
En kasein-test ble den neste prosedyren utføres på den gram-positive bakterien for å finne ut om bakterien kan produsere enzymet casease., En inoculating løkken ble flamme sterilisert, dekket med noen bakteriell vekst, og spredt på en melk agar plate. Inkubasjon av denne platen ble gjort i et 35°C innstilling for fem dager.
En maltose test var den neste metoden som brukes for å bekrefte identiteten til den ukjente bakterien. Det ville avgjøre om eller ikke bakterien kunne produsere syre fra maltose gjæring. En flamme sterilisert inoculating loop med bakterievekst ble rørt rundt middels. Røret ble deretter inkubert ved 35°C i fem dager.,
RESULTATER
Inkludert i Tabell 1 er tester som er utført, materialer som er brukt, temperaturer på inkubasjon, og resultatene fra den gram-negative bakterien, Tabell 2 viser disse for de gram-positive. Inkludert i Flytskjema 1 er testene og resultatene for den gram-negative bakterien, Flytskjema 2 viser disse for de gram-positive.,d=»5fa084a25a»>Maltose test
DISKUSJON / KONKLUSJON
De ulike testene fra mikrobiologisk lab klasse håndboken som ble utført på både gram-negative og gram-positive bakterier er hva som førte til deres identitet., Det første skrittet ble tatt isolere bakterien fra opprinnelige buljong #105 i to separate kolonier ved hjelp av kvadranten strek metode på et næringsstoff agar plate.
Etter at den første strek plate inkuber ved romtemperatur i fem dager var det vekst i de første to streker, men de to siste hadde ingen. Denne veksten bare besto av ett bestemt koloni, andre ikke var til stede. Dette ledet til den gram-farging av at kolonien, en annen strek plate på næringsrik agar i et forsøk på å vokse behov for andre koloni, og bruk av Mannitol Salt Agar plate.,
Ved å observere gram farget lysbilde av den første koloni under mikroskopet rosa coccobacilli ble sett. Å se disse nesten runde stenger viste seg at dette var en gram-negative bakterier koloni. Være at alle gram-negative valg var stenger, dette gjorde ikke begrense noen av mulighetene.
å Vite at den gram-negative bakterien vokste, kvadranten strek metoden ble brukt igjen på et næringsstoff agar plate i håp om å vokse den gram-positive bakterien som godt., Også bruke buljong fra #105 tube, en Mannitol Salt Agar plate var belagt være at den velger for gram-positiv bakterie vekst. Når du sjekker resultatene etter inkubering, var det ingen vekst på denne platen, og fortsatt ingen andre distinkte koloni. En isolert gram-positive bakterien merket Alt 108 ble da gitt.
Den første testen som er utført på gram-negative kolonien ble et citrate test ved hjelp av en skråstilling på grønn Simmon s Citrate agar inokulert ved å sette vekst på toppen av skrå. Etter inkubering skrå hadde slått en blå farge, noe som resulterer i en positiv test., Dette viste at bakterien ikke bruker citrate som sin primære karbon kilde. Dette er også utelukket Escherichia coli som en mulighet for min gram-negative bakterien. Neste test var Kligler Strykejern test.
Kligler Strykejern testen besto av knivstikking en skrå for å teste for reduksjon av svovel, fermentering av glukose, og gjæring av laktose. Etter inkubasjon, øverst på skrå hadde slått en rød farge og bunnen var gul. Disse resultatene viste et negativt resultat for hydrogensulfid siden det ikke var noe svart i tube, noe som betydde Proteus vulgaris var ikke lenger et alternativ., Den røde fargen og gul bunn begge viste positive glukose gjæring som utelukkes, Pseudomonas aeruginosa. Både Proteus vulgaris og Pseudomonas aeuginosa ble styrt ut av den negative laktose resultat. Den neste metoden som ble brukt, var en Urea-test.
Denne testen besto av omrøring bakteriell vekst i et rør av phenol red og urea for å teste for tilstedeværelse av syre. Etter inkubering suppen var fortsatt en gul farge, noe som gir et negativt resultat. Dette bekreftet at Enterobacter aerogenes var den gram-negative bakterien. En Methyl-Rød-test ble også utført for å bekrefte dette svaret.,
bakteriell vekst ble rørt inn i MR-VP og protein buljong for å finne ut om syre kan bli produsert som et resultat av glukose gjæring. Etter inkubering, suppen var en gul farge; et negativt resultat. Dette bekreftet også at den ukjente bakterien var Enterobacter aerogenes.
Den første testen som er gjort på en gram-positiv vekst var en gramfarging. Etter å gjøre prosedyren involverer crystal violet, jod, alkohol, og safranin, og vise lysbilde under mikroskopet, lilla stenger ble sett., Formen blir stenger snevret inn valg for å Bacillus cereus og Bacillus subtilis. Den neste testen som ble utført på denne veksten var en kasein-test.
Bakteriell vekst var spredt på en melk agar plate for å se om bakterien produsert casease og bryte ned kasein. Etter inkubering, platen hadde hvit vekst på det, og gi et negativt resultat. Dette negativt resultat gjort det mulig å utelukke muligheten ofBacillus cereus. Dette betydde en bekreftelse på at den gram-positive bakterien var Bacillus subtilis. For å få en ny bekreftelse maltose testen ble utført.,
Bakterievekst ble rørt inn i et rør som inneholder en rød maltose medium for å teste for syre som et resultat av maltose gjæring. Etter inkubering, væsken var en gul farge, noe som gir et positivt resultat for syre produksjon. Dette resultatet er bekreftet den bakterien som Bacillus cereus. Dette var en motsatt resultat enn kasein test hadde vist.
Etter å ha snakket med lab-professor om resultatene, kasein testen ble bekreftet å ha ekte resultater. Den ukjente gram-positive bakterien ble gjort som Bacillus cereus, og gram-negative blir Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes er vanligvis sett på som å være årsak til nedre luftveier infeksjoner, hud og mykt vev infeksjoner, urinveisinfeksjoner (Uvi), endokarditt, intra-abdominal infeksjoner, septisk artritt, osteomyelitt, CNS-infeksjoner, og oftalmologisk infeksjoner. (2) En sak med Enterobacter infeksjoner er at de ofte ikke kan være differensiert fra andre akutte bakterielle infeksjoner.
Enkelt-agent antimocribal terapi er vanligvis brukes i tilfeller av Enterobacter infeksjoner., (3) Beta-lactamer, Aminoglykosider, Fluroquinolones, og Trithomprim-sulfamethoxazone (TMP-SMZ) er alle antibiotika brukt regelmessig for å behandle disse typer infeksjoner. (2) Et problem med dette er at når du får for mye eksponering for disse stoffene motstanden er ofte utviklet, som har i dag vist et stort problem med disse infeksjonene. På grunn av disse motstand, kombinerer antibiotika med forskjellige strukturer er nå brukt som behandling for de infeksjoner, kombinasjon terapi.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver, og Susie Gero. Lab-Håndboken for Generell Mikrobiologi., N. p.: n.s., 2011. Skrive.