PMC (Suomi)

TEKSTI

Clostridium difficile on itiöllinen anaerobinen sairaalainfektioiden taudinaiheuttaja liittyy lieviä tai jopa hengenvaarallisia ripuli tai koliitti (1, 2). C. difficile kolonisaatio kasvaa pituus sairaalan oleskelun jälkeen ympäristön altistuminen itiöt tai kontakti tartunnan henkilö (3). C. difficile-itiöiden kontaminaatiota ja eloonjäämistä sairaaloiden elottomilla pinnoilla on raportoitu (4, 5), ja niiden on osoitettu liittyvän ristiinsiirtymiseen (6, -8).,

Clostridium difficile-itiöiden inaktivointi ja hävittäminen ovat haaste, ja on tutkittu useita suhteellisen uusia tekniikoita, kuten vetyperoksidihöyryä, UV-säteilyä tai kaasumaisia plasmajärjestelmiä.(5, 6, 9, 10). Tällaisten tekniikoiden validoinnissa olisi käytettävä optimaalisia talteenottomenetelmiä bakteerien itiöiden lopettamisen tai hävittämisen kvantifioimiseksi paremmin.

erilaisia menetelmiä on käytetty C. difficilen havaitsemiseen sairaalaympäristöstä vaihtelevin tuloksin (11, 12). Tässä raportoimme eri menetelmien arvioinnista C: n havaitsemiseksi ja talteen ottamiseksi., difficile itiöt materiaaleja yleisesti löytyy sairaalaympäristössä.

(tästä tutkimuksesta saadut alustavat tiedot esiteltiin julisteena Euroopan kliinisen mikrobiologian ja tartuntatautien kongressissa Barcelonassa Espanjassa toukokuussa 2014.)

yksi C. difficile reference-kanta, ATCC 700057 (Cruinn Diagnostics, Irlanti) ja yksi epätyypillinen kliininen isolaatti (Diagnostic Laboratory, Beaumont Hospital, Dublin, Irlanti) otettiin mukaan tutkimukseen. Muutos C. difficile spore preparation protocol kuvattu Chilton et al. käytettiin (13). Lyhyesti C., difficile rokotettiin esiduced brain heart infusion täydennettynä hiivauutteella ja L-kysteiinillä, inkuboitiin anaerobisesti 37°C: ssa 48 tunnin ajan ja levitettiin 10 Columbia blood agar-levyyn (Oxoid, Yhdistynyt kuningaskunta), joita inkuboitiin anaerobisesti 37°C: ssa 10 päivän ajan (14). Kasvu kerättiin levyistä solukaavin ja suspendoitiin 1 ml: aan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS)–etanolia (50% ). Suspensioita inkuboitiin huoneenlämmössä 1 tunnin ajan jaksoittaisella sekoittamisella., Spore keskeytykset olivat sentrifugoidaan 10 min 16000 x g, ja pelletit olivat sekoitettava uudelleen 1 ml: aan PBS. Itiöluvut ja puhtaus määritettiin mikroskopialla käyttäen Schaeffer-ja Fulton-itiöpesäkkeitä (Sigma-Aldrich, Irlanti). Suspensioita säädettiin pitoisuudeksi noin 105 PMY/ml (yksi pesäke vastaa yhtä itiötä), ja sarja 1:10 laimennoksia valmistettiin PBS: ssä.

C., difficile spore suspensiot (50 µl), jotka vaihtelevat 105-10 PMY/ml, lisättiin kahtena 25 cm2 osaan polyuretaanipatjakangasta (Meditec Medical, Irlanti), polypropeeni (GoodFellow Cambridge, Ltd., Yhdistynyt kuningaskunta) ja ruostumaton teräs, kaikki dekontaminoituneet kuten edellä on kuvattu (15). Pinnoille levitetyt itiösuspensiot kuivattiin ilmassa yli 2 tunnin ajan. pinnoista otettiin näytteitä esilämmitetyillä rayonipyyhkeillä ja nailon-flokatuilla pyyhkäisynäytteillä (Copan, Italia) ja ne sijoitettiin 3 ml: n PBS: ään. Vanupuikesuspensioiden sarja-laimennokset rokotettiin esikypsytettyyn C. difficile selektiiviset levyt-C., difficile agar base CM0601 plus C. difficile supplement SR0096 (250 mg/litra d-sykloseriinia, 8 mg/litra kefoksitiinia) ja 7% (vol/vol) defibrinated horse blood (SR0050)—toimittama Oxoid for enumeration of PMU/ml. Steriili yhteyttä levyt (VWR) kaadettiin laboratoriossa, jossa C. difficile-selektiivinen agar ja soveltaa kunkin osan 20 s, varmistaa yritys ottaa yhteyttä pinnan kanssa. Sekä pyyhkäisynäytteiden että kosketuslevyjen alakulturoidut levyt inkuboitiin yön yli anaerobisesti 37°C: ssa.pesäke laskettiin seuraavana päivänä., Havaitsemisraja (LOD) määriteltiin itiöiden alimmaksi pitoisuudeksi, joka havaittiin tietyllä menetelmällä. Kaikki menetelmät arvioitiin itsenäisesti kohdistaen koko osa, ja niiden kykyä havaita ja palauttaa C. difficile itiöt verrattiin. Tilastollinen analyysi tehtiin GraphPad Prism 5.00-ohjelmistolla. Eri menetelmien palautumisprosentin kolmen riippumattoman kokeen keinot analysoitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA) ja Tukeyn monivertailutestillä.,

Vuonna 1983 yksi ensimmäisistä raportteja vertaamalla menetelmiä talteenottoon C. difficile-itiöitä ympäristön lasin pintaan osoitti, että kostutettua, liima melat, ja ota levyt, ota yhteyttä levyt olivat ylivoimaisesti tehokkain tapa, havaita itiöitä alhaisella tasolla, on yksinkertaisempi käyttää ja suhteellisen nopeasti (16). Sen jälkeen tutkimus-ja tautiepidemiatutkimuksissa on käytetty erilaisia menetelmiä, kuten pyyhkäisynäytteitä, kosketuslevyjä, käsineitä ja sienieläimiä, joiden tulokset ovat vaihtelevia. Tässä osoitamme, että kosketuslevyt saavuttivat korkeimman talteenoton C., difficile itiöt (14% – 92%) eri pinnoilta, mukaan lukien patjamateriaali, polypropeeni ja ruostumaton teräs, vahvistavat ja laajentavat Buggy et al: n tuloksia. (16) lasin talteenottoon. Talteenotto oli tehokasta myös flokatuilla pyyhkäisynäytteillä (14-76%), ja vähiten tehokas menetelmä oli rayonipyyhe (7-58%) (Kuva. 1 A ja andB).B). Palautumisprosentti oli suoraan verrannollinen alkuperäisen siirrosaineen kokoon—eli 105 PMY/ml: n siirros mahdollisti kontaktilevyjen palautumisen jopa 92% ja 10 PMY/ml: n siirrosaineen peräti 14%., Kosketuslevyt olivat myös herkimpiä havaitsemaan itiöitä vähintään 10 PMY/ml: n inokulaatilla, kun taas flokatuissa pyyhkäisynäytteissä LOD oli 102 PMY/ml ja rayonipyyhkeissä 103 PMY/ml, mutta tämä koski vain kliinistä isolaattia. Kliinisen isolaatin (p < 0, 05) (Taulukko 1) kontaktilevyt olivat parempia kuin polypropeenissa olevat pyyhkäisynäytteet (p < 0, 05-p < 0, 001), kun taas flokattujen ja rayonipyyhkeiden välillä ei ollut merkittävää eroa., Vaikka tilastollinen analyysi ei paljasta mitään merkittävää eroa saantojen välillä kaikki pinnat tutkittu saantojen patja materiaali oli hieman pienempi kuin nuo kaksi muuta pintoja. Näiden kahden isolaatin välillä ei myöskään havaittu tilastollista eroa.

C., difficile-itiöt voivat kulkeutua ympäristöön sekä oireettomien että oireilevien potilaiden toimesta ja ne voivat säilyä jopa 5 kuukautta elottomilla pinnoilla (17). Ne vastustavat useimpien sairaaloiden desinfiointiaineiden ja useimpien muiden puhdistusmenetelmien bakterisidisia vaikutuksia (18). Siksi interventioita olisi seurattava tiloissa, joissa C. difficile carriers on tällä hetkellä tai aiemmin ollut. Raportointi parempia menetelmiä nopeuden ja herkkyyden, kuten yhteystiedot levy ja ryntäävät tossut raportoitu täällä, antaa tarkemman arvion C., vaikea taakka verrattuna aiemmin ilmoitettuihin menetelmiin. Koska C. difficile on näkyvin endospore nykypäivän terveydenhuollon ympäristössä ja aiheuttaa merkittävän infektioriskin haavoittuville potilaille, on kasvava tarve tarkasti määrittää C. difficile urheilu saastuminen terveydenhuollon ympäristössä. Tarkoituksena olisi arvioida uusia menetelmiä ympäristön saastumisen puhdistamiseksi ja korreloimiseksi infektioriskiin ja taudinpurkausten esiintymiseen., On kuitenkin välttämätöntä parantaa hyväksyttyjä hyödyntämismenetelmiä käyttäen materiaaleja, jotka edustavat sairaalaympäristössä olevia materiaaleja.