Von CPR Louisville am 1.Juli 2014 | 18:06 | Print
UNKNOWN LAB REPORT
Unknown Number 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Allgemeine Mikrobiologie I
Frühjahr 2014
EINFÜHRUNG
Das Identifizieren und Verstehen von Mikroorganismen ist aus mehreren Gründen wichtig, da Bakterien eine Hauptursache für menschliche Krankheiten und Krankheiten sind., In der Lage zu sein, mehr Infektionen und Krankheiten zu heilen, kann getan werden, indem man gut über verschiedene Mikroorganismen informiert ist und wie sie in verschiedenen Umgebungen funktionieren. Diese Studie zur Identifizierung unbekannter Bakterien wurde mit verschiedenen Techniken durchgeführt, die bis zu diesem Zeitpunkt in der mikrobiologischen Laborklasse verwendet wurden.
MATERIALIEN UND METHODEN
Vom Professor für Mikrobiologie erhielt ein Reagenzglas mit Brühe, das unbekannte Bakterien enthielt, die mit der Nummer 105 gekennzeichnet waren. Eine Vielzahl von Verfahren, die in der Mikrobiologie-Laborklasse gelernt wurden, wurden an den unbekannten Bakterien durchgeführt., Diese Tests wurden, sofern nicht anders angegeben, wie im microbiology course Lab Manual von Mcdonald, Thoele, Salsgiver und Gero (1) beschrieben, durchgeführt.
Die erste erforderliche Methode war die Quadrant Streak-Methode. Dies wurde getan, um die beiden unbekannten Bakterien auf einer Nährstoff-Agar-Platte mittels einer Impfschleife, Bunsenbrenner und der Brühe zu isolieren. Die Inkubation dieser Platte bei Raumtemperatur wurde dann durchgeführt, um die Bestimmung von zwei getrennten Kolonien zu versuchen., Das Wachstum aus einer Kolonie auf dieser Platte wurde dann auf seine Gram-Reaktion durch Schritte der Gram-Färbung mit Jod, Kristallviolett, Alkohol und Safranin getestet, um eine einzige Art von Bakterium zu finden. Beobachtung unter dem Mikroskop reavealed die Gram-Reaktion des Bakteriums aus der Kolonie. In Tabelle 1 sind die Verfahren, die verwendeten Materialien, die Inkubationstemperatur und die aufgezeichneten Ergebnisse für das erste Bakterium aufgeführt. In diesen Tests enthalten sind Citrat -, Glukose-und Laktosegärung, Schwefelreduktion durch einen Kligler-Eisentest, Harnstofftest und Methylrottest.,
Anschließend wurden die notwendigen Schritte unternommen, um einen Simmons-Citrat-Test an der ersten Bakterienkolonie unter Verwendung einer Impfschleife durchzuführen, die durch die Flamme eines Bunsenbrenners sterilisiert wurde, um das Wachstum auf die grüne Agar-Neigung zu bringen. Die Inkubation dieses Röhrchens erfolgte dann fünf Tage lang in einer 35°C-Einstellung. Die Bestimmung der Verwendung von Citrat als einziger Kohlenstoffquelle durch das Bakterium war der Grund für diesen Test.
Ein Kligler-Eisentest wurde unter Verwendung des Wachstums aus der ersten Kolonie durchgeführt, um die Möglichkeiten des möglichen Bakteriums durch Bestimmung seiner Fermentationsfähigkeiten für Glukose und Laktose einzugrenzen., Das Medium wurde von einer flammensterilisierten Impfnadel mit Bakterienwachstum darauf erstochen und fünf Tage lang bei 35°C inkubiert.
Ein Harnstofftest war der nächste Test an dieser gramnegativen Kolonie. Dies wurde durch Rühren eines Teils des Bakteriums in den pH-Indikator Phenol rot und Harnstoff Medium Flamme sterilisierte Impfschleife durchgeführt. Es wurde dann in einer 35°C-Einstellung für achtundvierzig Stunden inkubiert. Die Entdeckung, ob das Bakterium eine Säure produzieren könnte oder nicht, war der Zweck hinter diesem Test., Ein Methylrottest wurde auch an den gramnegativen Bakterien durchgeführt, um festzustellen, ob das Bakterium nach der Fermentierung von Glukose Säure produzierte oder nicht. Eine flammensterilisierte Impfschleife mit Bakterienwachstum wurde um die Röhre des Protein-und Glucose-MR-VP-Mediums gerührt und achtundvierzig Stunden lang bei 35°C inkubiert. Diese Tests wurden durchgeführt, um das Endergebnis des unbekannten gramnegativen Bakteriums zu bestätigen.
Bei dem Versuch, eine Sekunde Bakterien zu finden, wurde eine zweite Nährstoff-Agar-Platte gestreift., Die zweite Methode zur Isolierung des zweiten Bakteriums, insbesondere eines grampositiven Bakteriums, wurde unter Verwendung einer mit einer Bunsenbrennerflamme sterilisierten Impfschleife durchgeführt, um Brühe aus dem ursprünglichen Röhrchen auf eine Mannitolsalz-Agar-Platte zu verteilen, die vier Tage lang bei 35°C inkubiert wurde. Nachdem kein Wachstum auftrat, wurde ein isoliertes grampositives Bakterienwachstum auf einer Neigung in einem Reagenzglas mit der Bezeichnung Alt 8 vom Laborleiter erhalten. Darauf wurden dann Tests durchgeführt., In Tabelle 2 sind die durchgeführten Tests, die verwendeten Materialien, die Inkubationstemperatur und ihre aufgezeichneten Ergebnisse für das zweite Bakterium aufgeführt. Casein-Test und ein Matlose-Test wurden durchgeführt.
Das erste Verfahren, das für dieses Wachstum erforderlich war, war ein Grammfleck. Kristallviolett, Jod, Alkohol und Safranin wurden verwendet. Die Gram-Reaktion des Bakteriums wurde getestet, um die Auswahl für das, was dieses Unbekannte sein könnte, einzugrenzen.
Ein Kaseintest war das nächste Verfahren, das an dem grampositiven Bakterium durchgeführt wurde, um festzustellen, ob das Bakterium das Enzym casease produzieren konnte., Eine Impfschleife wurde flammensterilisiert, mit etwas Bakterienwachstum bedeckt und auf eine Milch-Agar-Platte ausgebreitet. Die Inkubation dieser Platte erfolgte in einer 35°C-Einstellung für fünf Tage.
Ein Maltosetest war die nächste Methode, um die Identität des unbekannten Bakteriums zu bestätigen. Es würde bestimmen, ob das Bakterium Säure aus Maltosegärung produzieren könnte oder nicht. Eine flammensterilisierte Impfschleife mit Bakterienwachstum wurde um das Medium gerührt. Die Röhre wurde dann fünf Tage lang bei 35°C inkubiert.,
ERGEBNISSE
In Tabelle 1 sind die durchgeführten Tests, die verwendeten Materialien, die Inkubationstemperaturen und die Ergebnisse des gramnegativen Bakteriums aufgeführt, Tabelle 2 zeigt diese für das grampositive. In Flussdiagramm 1 sind die Tests und ihre Ergebnisse für das gramnegative Bakterium enthalten, Flussdiagramm 2 zeigt diese für das Grampositive.,d=“5fa084a25a“>Maltosetest
DISKUSSION / SCHLUSSFOLGERUNG
Die verschiedenen Tests aus dem Mikrobiologielabor-Klassenhandbuch, die sowohl an gramnegativen als auch an grampositiven Bakterien durchgeführt wurden, haben zu ihrer Identität geführt., Der erste Schritt bestand darin, das Bakterium aus der ursprünglichen Brühe #105 mit der Quadrant Streak-Methode auf einer Nährstoff-Agar-Platte in zwei separate Kolonien zu isolieren.
Nachdem die erste Streifenplatte fünf Tage bei Raumtemperatur inkubiert war, gab es Wachstum auf den ersten beiden Streifen, aber die letzten beiden hatten keine. Dieses Wachstum bestand nur aus einer bestimmten Kolonie, eine zweite war nicht vorhanden. Dies führte dann zur Gram-Färbung dieser Kolonie, einer zweiten Streifenplatte auf Nährstoff-Agar in einem Versuch, die benötigte zweite Kolonie zu züchten, und der Verwendung einer Mannitol-Salz-Agar-Platte.,
Bei der Beobachtung des gram befleckten Objektträgers der ersten Kolonie unter dem Mikroskop wurden rosa Kokkobazillen gesehen. Das Sehen dieser fast runden Stäbchen bewies, dass dies eine gramnegative Bakterienkolonie war. Da alle gramnegativen Optionen positiv waren, schränkte dies keine der Möglichkeiten ein.
In dem Wissen, dass das gramnegative Bakterium wuchs, wurde die Quadrant Streak-Methode erneut auf einer Nährstoff-Agar-Platte verwendet, in der Hoffnung, auch das grampositive Bakterium zu züchten., Auch mit der Brühe aus #105 Tube wurde eine Mannitolsalz-Agar-Platte beschichtet, die sie für grampositives Bakterienwachstum auswählt. Bei der Überprüfung der Ergebnisse nach der Inkubation gab es kein Wachstum auf dieser Platte und immer noch keine zweite ausgeprägte Kolonie. Anschließend wurde ein isoliertes grampositives Bakterium mit der Bezeichnung Alt 108 verabreicht.
Der erste Test, der an der gramnegativen Kolonie durchgeführt wurde, war ein Citrattest mit einer Neigung von grünem Simmons Citrat-Agar, der durch Wachstum auf die Oberseite der Neigung geimpft wurde. Nach der Inkubation hatte sich die Neigung blau verfärbt, was zu einem positiven Test führte., Dies zeigte, dass das Bakterium Citrat als primäre Kohlenstoffquelle verwendet. Dies schloss auch Escherichia coli als Möglichkeit für mein gramnegatives Bakterium aus. Der nächste Test war der Kligler Eisentest.
Der Kligler-Eisentest bestand darin, eine Neigung zu stechen, um auf Reduktion von Schwefel, Fermentation von Glukose und Fermentation von Laktose zu testen. Nach dem Inkubieren hatte sich die Oberseite der Neigung rot verfärbt und der Boden war gelb. Diese Ergebnisse zeigten ein negatives Ergebnis für Schwefelwasserstoff, da sich kein Schwarz in der Röhre befand, was bedeutete, dass Proteus vulgaris keine Option mehr war., Die rote Farbe und der gelbe Boden zeigten beide die positive Glukosegärung, die Pseudomonas aeruginosa ausschloss. Sowohl Proteus vulgaris als auch Pseudomonas aeuginosa wurden durch das negative Laktoseergebnis ausgeschlossen. Die nächste verwendete Methode war ein Harnstofftest.
Dieser Test bestand darin, das Bakterienwachstum in eine Tube Phenolrot und Harnstoff zu rühren, um auf das Vorhandensein von Säure zu testen. Nach der Inkubation war die Brühe noch eine gelbe Farbe, was zu einem negativen Ergebnis führte. Dies bestätigte, dass Enterobacter aerogenes das gramnegative Bakterium war. Ein Methylrottest wurde ebenfalls durchgeführt, um diese Antwort zu bestätigen.,
Das Bakterienwachstum wurde in die MR-VP und Proteinbrühe gerührt, um festzustellen, ob Säure durch Glukosegärung erzeugt werden konnte. Nach der Inkubation war die Brühe eine gelbe Farbe; ein negatives Ergebnis. Dies bestätigte auch, dass das unbekannte Bakterium Enterobacter aerogenes war.
Der erste Test, der am grampositiven Wachstum durchgeführt wurde, war ein Grammfleck. Nach dem Eingriff mit Kristallviolett, Jod, Alkohol und Safranin und dem Betrachten des Objektträgers unter dem Mikroskop wurden violette Stäbchen gesehen., Die Form der Stäbchen verengte die Optionen auf Bacillus cereus und Bacillus subtilis. Der nächste Test, der an diesem Wachstum durchgeführt wurde, war ein Kaseintest.
Das Bakterienwachstum wurde auf eine Milch-Agar-Platte ausgebreitet, um zu sehen, ob das Bakterium Casease produzierte und das Kasein abbaute. Nach der Inkubation hatte die Platte ein weißes Wachstum, was zu einem negativen Ergebnis führte. Dieses negative Ergebnis ermöglichte es, die Option VONBACILLUS cereus. Dies bedeutete eine Bestätigung, dass das grampositive Bakterium Bacillus subtilis war. Um eine zweite Bestätigung zu erhalten, wurde ein Maltosetest durchgeführt.,
Das Bakterienwachstum wurde in ein Röhrchen mit einem roten Maltosemedium gerührt, um als Ergebnis der Maltosegärung auf Säure zu testen. Nach der Inkubation hatte die Flüssigkeit eine gelbe Farbe, was zu einem positiven Ergebnis für die Säureproduktion führte. Dieses Ergebnis bestätigte das Bakterium als Bacillus cereus. Dies war ein entgegengesetztes Ergebnis als der Caseintest gezeigt hatte.
Nachdem der Caseintest mit dem Laborprofessor über die Ergebnisse gesprochen hatte, wurde bestätigt, dass er echte Ergebnisse hatte. Das unbekannte grampositive Bakterium wurde als Bacillus cereus und das gramnegative als Enterobacter aerogenes konfisziert.,
Enterobacter aerogenes wird häufig als Ursache für Infektionen der unteren Atemwege, Haut-und Weichteilinfektionen, Harnwegsinfektionen (UTIs), Endokarditis, intraabdominale Infektionen, septische Arthritis, Osteomyelitis, ZNS-Infektionen und Augeninfektionen angesehen. (2) Ein Problem bei Enterobacter-Infektionen besteht darin, dass sie häufig nicht von anderen akuten bakteriellen Infektionen unterschieden werden können.
Bei Enterobacter-Infektionen wird typischerweise eine Antimokribaltherapie mit einem einzigen Wirkstoff angewendet., (3) Beta-Lactame, Aminoglykoside, Fluochinolone und Trithomprim-Sulfamethoxazon (TMP-SMZ) sind alle Antibiotika, die regelmäßig zur Behandlung dieser Arten von Infektionen eingesetzt werden. (2) Ein Problem dabei ist, dass bei zu starker Exposition gegenüber diesen Medikamenten häufig Resistenzen entwickelt werden, die derzeit ein großes Problem mit diesen Infektionen gezeigt haben. Aufgrund dieser Resistenzen wird die Kombination von Antibiotika mit verschiedenen Strukturen jetzt als Behandlung für die Infektionen, Kombinationstherapie verwendet.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver, und Susie Gero. Laborhandbuch für allgemeine Mikrobiologie., N. p.: n. p., 2011. Druck.