Ein einkettenvariables Fragment (scFv) ist ein Fusionsprotein der variablen Regionen der schweren (VH) und leichten Ketten (VL) von Immunglobulinen, verbunden mit einem kurzen Linker Peptid von zehn bis etwa 25 Aminosäuren. Der Linker ist normalerweise reich an Glycin für Flexibilität sowie Serin oder Threonin für Löslichkeit und kann entweder den N-Terminus des VH mit dem C-Terminus des VL verbinden oder umgekehrt., Dieses Protein behält die Spezifität des ursprünglichen Immunglobulins trotz Entfernung der konstanten Regionen und der Einführung des Linkers bei.
Diese Moleküle wurden geschaffen, um die Phagen-Anzeige zu erleichtern, wo es sehr bequem ist, die Antigen-bindende Domäne als ein einzelnes Peptid auszudrücken. Alternativ kann scFv direkt aus unterklonten schweren und leichten Ketten erstellt werden, die von einem Hybridom abgeleitet sind. ScFvs haben viele Anwendungen, z. B. Durchflusszytometrie, Immunhistochemie und als Antigen-bindende Domänen künstlicher T-Zell-Rezeptoren.,
Im Gegensatz zu monoklonalen Antikörpern, die häufig in Säugetierzellkulturen produziert werden, werden scFvs häufiger in Bakterienzellkulturen wie E. coli produziert
Die Fragmentantigen-Bindung (Fab-Fragment) ist eine Region auf einem Antikörper, der an Antigene bindet. Es besteht aus einer konstanten und einer variablen Domäne jeder schweren und leichten Kette. Diese Domänen formen das Paratop — die Antigen-Bindungsstelle-am aminoterminalen Ende des Monomers. Die beiden variablen Domänen binden das Epitop an ihre spezifischen Antigene.,
In einer experimentellen Umgebung können Fc-und Fab-Fragmente im Labor erzeugt werden. Das Enzym Papain kann verwendet werden, um ein Immunglobulinmonomer in zwei Fab-Fragmente und ein Fc-Fragment zu spalten. Das Enzym Pepsin spaltet sich unterhalb des Bereichs, so dass ein F(ab‘)2-Fragment und ein pFc‘ – Fragment gebildet werden. Das F (ab‘)2-Fragment kann durch leichte Reduktion in zwei Fab‘ – Fragmente aufgeteilt werden.,
Die variablen Bereiche der schweren und leichten Ketten können zu einem einkettenvariablen Fragment (scFv) verschmolzen werden, das nur halb so groß ist wie das Fab-Fragment, behält jedoch die ursprüngliche Spezifität des Elternimmunglobulins bei.
Ein Diabody besteht aus zwei scFvs, die mit Linker Peptiden verbunden sind, die zu kurz sind, damit sich die beiden variablen Regionen zusammenfalten können (etwa fünf Aminosäuren), was die scFvs zur Dimerisierung zwingt. Es wurde gezeigt, dass Diabodien Dissoziationskonstanten haben, die bis zu 40-fach niedriger sind als entsprechende scFvs, was bedeutet, dass sie eine viel höhere Affinität zu ihrem Ziel haben.,
Zwei SCFVS (die an dieselben oder verschiedene Antigene binden) können auch mit längeren Linkern wie Leucinreißverschlüssen verbunden sein.