TEXT
Clostridium difficile är en sporbildande anaerob nosokomial patogen associerad med mild till livshotande diarré eller kolit (1, 2). C. difficile kolonisering ökar med längden på sjukhusvistelsen efter miljöexponering för sporer eller kontakt med en smittad person (3). Kontaminering och överlevnad av C. difficile sporer på sjukhus livliga ytor har rapporterats (4, 5) och visat sig vara associerad med korsöverföring (6,-8).,
inaktivering och utrotning av Clostridium difficile sporer är en utmaning, och flera relativt nya tekniker har undersökts, såsom väteperoxidånga, UV-strålning eller gasformiga plasmasystem(5, 6, 9, 10). Validering av sådana tekniker bör använda optimala återvinningsmetoder för att bättre kvantifiera bakteriesporedödande eller utrotning.
en mängd olika metoder har använts för att upptäcka C. difficile från sjukhusmiljön med varierande resultat (11, 12). Här rapporterar vi en utvärdering av olika metoder för att upptäcka och återställa C., difficile sporer från material som vanligen finns i sjukhusmiljön.
(preliminära data från denna studie presenterades som en affisch vid European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Barcelona, Spanien, maj 2014.)
En C. difficile-referens-stam ATCC 700057 (Cruinn Diagnostik, Irland), och en uncharacterized kliniska isolat (Diagnostiskt Laboratorium, Beaumont Hospital, Dublin, Irland) inkluderades i studien. En modifiering av C. difficile spore preparation protocol beskrivs av Chilton et al. användes (13). Kortfattat, C., difficile inokulerades till prereduced hjärnhjärtinfusion kompletterad med jästextrakt och L-cystein, inkuberades anaerobt vid 37°C för 48 h och spreds på 10 Columbia blodagarplattor (Oxoid, Storbritannien), som inkuberades anaerobt vid 37°C i 10 dagar (14). Tillväxten samlades från plattorna med hjälp av en cellskrapa och suspenderades i 1 ml fosfatbuffrad saltlösning (PBS)–etanol (50% ). Suspensionerna inkuberades vid rumstemperatur under 1 h med periodisk blandning., Sporsuspensioner centrifugerades i 10 min vid 16 000 × g, och pelletsna återsuspenderades i 1 ml PBS. Sports siffror och renhet bestämdes genom mikroskopi med användning av Schaeffer och Fulton Sports fläck kit (Sigma-Aldrich, Irland). Suspensioner justerades till en koncentration av cirka 105 CFU / ml (en koloni motsvarar en sports), och Serie 1:10 utspädningar framställdes i PBS.
C., difficile Sports suspensioner (50 µl), som sträcker sig från 105 till 10 CFU/ml, tillsattes i två exemplar till 25-cm2 sektioner av polyuretan madrass tyg (Meditec Medical, Irland), polypropen (GoodFellow Cambridge, Ltd., Förenade kungariket) och rostfritt stål, alla dekontaminerade enligt tidigare beskrivning (15). Spore suspensioner applicerade på ytorna lufttorkades över 2 h. ytorna samplades med hjälp av premoistened rayon swabs och nylon flockade swabs (Copan, Italien) och placerades i 3 ml PBS. Seriella utspädningar av swab-suspensionerna inokulerades på prepoured C. difficile selective plates-C., svårt agar base CM0601 plus C. difficile komplettera SR0096 (250 mg/liter d-cycloserine, 8 mg/liter cefoxitin) och 7% (vol/vol) defibrinated hästblod (SR0050)—som tillhandahålls av Oxoid för uppräkning av CFU/ml. Sterila kontaktplattor (VWR) hälldes i laboratoriet med C. difficile selective agar och applicerades på varje sektion i 20 s, vilket säkerställer fast kontakt med ytan. Subkulturerade plattor från både svabbar och kontaktplattor inkuberades över natten anaerobt vid 37°C. Koloniräkning utfördes följande dag., Detektionsgränsen (LOD) definierades som den lägsta koncentration av sporer som användes som detekterades med en specifik metod. Alla metoder utvärderades självständigt med inriktning på hela avsnittet, och deras förmåga att upptäcka och återställa C. difficile sporer jämfördes. Statistisk analys utfördes med hjälp av GraphPad Prism 5.00 programvara. Medlen för tre oberoende experiment av procentandelen återhämtning för de olika metoderna analyserades genom envägsanalys av varians (ANOVA) och Tukeys multipeljämförelsetest.,
1983 var en av de första rapporterna som jämförde metoder för återvinning av C. difficile sporer från en miljöglasyta att av swabs, adhesiva paddlar och kontaktplattor var kontaktplattor den överlägset mest effektiva metoden, detekterade sporer på låga nivåer, var enklare att använda och relativt snabb (16). Sedan dess har olika metoder, inklusive swabs, kontaktplattor, handskar och svampar, använts för forsknings-och utbrottsutredningar med varierande resultat. Här visar vi att kontaktplattor uppnådde den högsta återhämtningen av C., difficile sporer (14% till 92%) från olika ytor, inklusive madrassmaterialet, polypropen och rostfritt stål, bekräftar och förlänger resultaten från Buggy et al. (16) för återvinning från glas. Återhämtningen var också effektiv för flockade swabs (14% till 76%), och den minst effektiva metoden var rayon swab (7% till 58%) (Fig. 1A och andB).H). Återvinningsprocenten var direkt proportionell mot storleken på det ursprungliga inokulatet-dvs ett inokulat på 105 CFU / ml tillät kontaktplattor att återhämta sig så mycket som 92% och så lite som 14% för en 10-CFU/ml inokulat., Kontaktplattor var också mest känsliga vid detektering av sporer vid ett minimum av 10 CFU/ml, medan LOD var 102 cfu / ml för flockade swabs och 103 cfu/ml för rayon swabs, men detta var bara sant för det kliniska isolatet. Statistiskt sett var kontaktplattorna bättre än flockade swabs på polypropen för det kliniska isolatet (P < 0.05) (Tabell 1) och ihållande överlägsen rayon swabs (P < 0.05 till p < 0.001) (Tabell 1), medan det inte fanns någon signifikant skillnad mellan flockade och rayon swabs., Även om statistisk analys inte visade någon signifikant skillnad i återvinningarna mellan alla undersökta ytor, minskade återvinningarna från madrassmaterialet något jämfört med de från de andra två ytorna. Dessutom sågs ingen statistisk skillnad mellan de två isolaten.
procentuell återhämtning av Clostridium difficile sporer av referensstammen (A) och kliniskt isolat (B) från tre miljöytor med hjälp av kontaktplattor, flockade kompresser och rayon kompresser., Felfält representerar standardfelet för medel (SEM) från minst tre oberoende experiment (n ≥ 3).,”1″> p-värde från statistisk analys ofa:
C., difficile sporer kan skjulas till miljön av både asymptomatiska och symptomatiska patienter och kan överleva i upp till 5 månader på livliga ytor (17). De motstår de bakteriedödande effekterna av de flesta sjukhus desinfektionsmedel och de flesta andra dekontamineringstekniker (18). Därför bör interventioner övervakas i rum som För närvarande eller tidigare ockuperats av C. difficile-bärare. Rapporteringen av förbättrade metoder när det gäller hastighet och känslighet, såsom kontaktplattan och flockade swabs rapporterade här, ger en mer exakt uppskattning av C., svår börda jämfört med tidigare rapporterade metoder. Med tanke på att C. difficile är den mest framträdande endosporen i dagens hälsovårdsinställning och utgör en signifikant infektionsrisk för utsatta patienter, finns det ett växande behov av att noggrant kvantifiera C. difficile spore-förorening i hälsovårdsmiljön. Detta skulle vara i syfte att bedöma nya metoder för dekontaminering och korrelera nivåer av miljöförorening med risken för infektion och förekomsten av utbrott., Ändå är förbättring av accepterade återhämtningsmetoder med hjälp av material som representerar de som finns i sjukhusinställningen en nödvändig förutsättning.