ett enda kedjevariabelt fragment (scFv) är ett fusionsprotein av de variabla regionerna av de tunga (VH) och lätta kedjorna (VL) av immunoglobuliner, förbundna med en kort linkerpeptid på tio till cirka 25 aminosyror. Linkern är vanligtvis rik på glycin för flexibilitet, såväl som serin eller treonin för löslighet, och kan antingen ansluta VH: S N-terminus med VL: S C-terminus eller vice versa., Detta protein behåller specificiteten hos det ursprungliga immunoglobulinet, trots avlägsnande av de konstanta regionerna och införandet av linkern.
dessa molekyler skapades för att underlätta fagdisplayen , där det är mycket bekvämt att uttrycka antigenbindningsdomänen som en enda peptid. Som ett alternativ kan scFv skapas direkt från underklonade tunga och lätta kedjor som härrör från en hybridoma. ScFvs har många användningsområden, t.ex. flödescytometri, immunohistokemi och som antigenbindande domäner av artificiella T-cellreceptorer.,
Till skillnad från monoklonala antikroppar, som ofta produceras i däggdjurscellkulturer, produceras scFvs oftare i bakteriecellkulturer som E. coli
fragmentet antigenbindande (fab fragment) är en region på en antikropp som binder till antigener. Den består av en konstant och en variabel domän för var och en av de tunga och lätta kedjan. Dessa domäner bildar paratopen-antigenbindningsstället — vid monomerens aminoterminala ände. De två variabla domänerna binder epitopen på deras specifika antigener.,
i en experimentell miljö kan fragment av Fc och Fab genereras i laboratoriet. Enzymet papain kan användas för att klyva en immunoglobulinmonomer i två Fab-fragment och ett Fc-fragment. Enzymet pepsin klyver under gångjärnsområdet, så ett f (ab’)2-fragment och ett PFC-fragment bildas. F (ab’)2-fragmentet kan delas upp i två Fab-fragment genom mild reduktion.,
de rörliga delarna av de tunga och lätta kedjorna kan smälta samman för att bilda ett enda kedjevariabelt fragment (scFv), som bara är hälften av Fab-fragmentets storlek, men behåller den ursprungliga specificiteten hos moderimmunoglobulin.
en diabody är två scFvs med förbundna med linkerpeptider som är för korta för att de två variabla regionerna ska vikas ihop (cirka fem aminosyror), vilket tvingar scFvs att dimerisera. Diabetiker har visat sig ha dissociationskonstanter upp till 40-faldigt lägre än motsvarande scFvs, vilket innebär att de har en mycket högre affinitet till sitt mål.,
två scFv (som binder till samma eller olika antigener) kan också anslutas med längre linkers såsom leucin blixtlås.