av CPR Louisville i juli 1, 2014 | 6:06 pm | Print
okänd LAB REPORT
okänt nummer 105
Michelle Sinovcic
bio 203: allmän mikrobiologi i
våren 2014
introduktion
identifiera och förstå mikroorganismer är viktigt av flera skäl att bakterier är en viktig orsak till mänsklig sjukdom och sjukdom., Att kunna bota fler infektioner och sjukdomar kan göras genom att vara välinformerad om olika mikroorganismer och hur de arbetar i olika miljöer. Denna studie av att identifiera okända bakterier gjordes genom att använda olika tekniker som används i mikrobiologilaboratorieklassen fram till denna punkt.
Material och metoder
ett provrör av buljong innehållande okända bakterier märkta med nummer 105 mottogs från mikrobiologilabbprofessorn. En mängd olika procedurer som lärdes i mikrobiologilabbklassen utfördes på de okända bakterierna., Dessa tester utfördes enligt instruktioner i mikrobiologikurslabbhandboken av Mcdonald, Thoele, Salsgiver och Gero (1) Om inte annat anges.
den första metoden som krävdes var quadrant streak-metoden. Detta gjordes för att isolera de två okända bakterierna på en näringsagarplatta genom användning av en inokulerande slinga, bunsenbrännare och buljongen. Inkubation av denna platta vid rumstemperatur utfördes sedan för att försöka bestämma två separata kolonier., Tillväxt från en koloni på denna platta testades sedan för dess Gramsvar genom steg av gramfärgning med jod, kristallviolett, alkohol och safranin för att hitta en enda typ av bakterie. Observation under ett mikroskop reavealed gramsvaret av bakterien från kolonin. Anges i Tabell 1 är de förfaranden som tas, material som används, inkubationstemperatur och deras inspelade resultat för den första bakterien. Ingår i dessa tester är Citrat, glukos och Laktosfjäsning, svavelreduktion genom ett Kligler Järntest, Urea test och Metylrött test.,
nödvändiga åtgärder vidtogs sedan för att utföra ett Simmons Citratetest på den första bakteriekolonin med hjälp av en inokulerande slinga steriliserad av en Bunsenbrännares flamma för att sätta tillväxt på den gröna agar-vinkeln. Inkubation av röret gjordes sedan i fem dagar i en 35 ° C-inställning. Bestämning av bakteriens användning av citrat som enda kolkälla var orsaken till detta test.
ett Kligler Järntest utfördes med användning av tillväxt från den första kolonin för att begränsa alternativen för den möjliga bakterien genom att bestämma dess fermentationskapacitet för glukos och laktos., Mediet knivhöggs av en flamma steriliserad inokulerande nål med bakteriell tillväxt på den och inkuberades vid 35°C i fem dagar.
ett Urea test var nästa test slutfört på denna gramnegativa koloni. Detta gjordes genom att omrör en del av bakterien i pH-indikatorn fenolröd och urea medium flame steriliserad inokulerande slinga. Den inkuberades sedan i en 35 ° C-inställning i fyrtioåtta timmar. Att upptäcka om bakterien kunde producera en syra var syftet bakom detta test., Ett Metylrött test utfördes också på de gramnegativa bakterierna för att bestämma huruvida bakterien producerade syra efter fermentering av glukos. En flamma steriliserad inokulerande slinga med bakteriell tillväxt på den omrördes runt röret av proteinet och glukos MR-VP-medium och inkuberades vid 35°C i fyrtioåtta timmar. Dessa tester utfördes för att bekräfta slutresultatet av den okända gramnegativa bakterien.
en andra näringsagarplatta strejkades i försöket att hitta en sekund av bakterier., Den andra metoden som behövs för att isolera den andra bakterien, speciellt en grampositiv bakterie, gjordes genom att använda en inokulerande slinga steriliserad av en Bunsenbrännarflamma för att sprida buljong från det ursprungliga röret på en mannitol saltagarplatta som inkuberades vid 35°C i fyra dagar. Efter att ingen tillväxt uppstod en isolerad gram-positiv bakterietillväxt på en vinkling i ett provrör märkt Alt 8 mottogs sedan från labbinstruktören. Tester utfördes sedan på det., Anges i Tabell 2 är de utförda testerna, material som används, inkubationstemperatur och deras inspelade resultat för den andra bakterien. Kaseintest och ett Matlostest utfördes.
det första förfarandet som krävdes för denna tillväxt var en gram-fläck. Kristallviolett, jod, alkohol och safranin användes. Bakteriens gramsvar testades för att begränsa val för vad detta okända kan vara.
ett kaseintest var nästa förfarande som utfördes på den grampositiva bakterien för att avgöra om bakterien kunde producera enzymet kaseas., En inokulerande slinga var flamma steriliserad, täckt med viss bakteriell tillväxt och spred sig på en mjölkagarplatta. Inkubation av denna platta gjordes i en 35 ° C-inställning i fem dagar.
ett maltostest var nästa metod som användes för att bekräfta identiteten hos den okända bakterien. Det skulle avgöra om bakterien skulle kunna producera syra från maltosfjäsning. En flamma steriliserad inokulerande slinga med bakteriell tillväxt omrördes runt mediet. Röret inkuberades sedan vid 35 ° C i fem dagar.,
resultat
som ingår i Tabell 1 är de utförda testerna, material som används, inkubationstemperaturer och resultaten från den gramnegativa bakterien, Tabell 2 visar dessa för den grampositiva. Ingår i Flowchart 1 är testen och deras resultat för den gramnegativa bakterien, Flowchart 2 visar dessa för gram-positiva.,D=”5fa084a25a”>maltostest
diskussion / slutsats
de olika testerna från mikrobiologilabbklasshandboken som utfördes på både gramnegativa och grampositiva bakterier är vad som ledde till deras identiteter., Det första steget som togs var att isolera bakterien från originalbuljong # 105 i två separata kolonier med hjälp av quadrant streak-metoden på en näringsagarplatta.
Efter att ha låtit den första strimmiga plattan inkubera vid rumstemperatur i fem dagar fanns tillväxt på de två första strimmorna, men de två sista hade ingen. Denna tillväxt bestod endast av en distinkt koloni, en andra var inte närvarande. Detta ledde sedan till gramfärgning av den kolonin, en andra streakplatta på näringsagar i ett försök att odla den nödvändiga andra kolonin och användningen av en Mannitolsaltagarplatta.,
När man observerar gramfläckade bilden av den första kolonin under mikroskopet sågs rosa coccobacilli. Att se dessa nästan runda stavar visade att detta var en gramnegativ bakteriekoloni. Eftersom alla gramnegativa alternativ var stavar, begränsade detta inte några möjligheter.
att veta att den gramnegativa bakterien växte, användes quadrant streak-metoden igen på en näringsagarplatta i hopp om att odla den grampositiva bakterien också., Också med hjälp av buljongen från # 105-röret, var en Mannitolsaltagarplatta belagd med att den väljer för gram-positiv bakterietillväxt. Vid kontroll av resultaten efter inkubation var det ingen tillväxt på denna tallrik, och fortfarande ingen andra distinkt koloni. En isolerad grampositiv bakterie märkt Alt 108 gavs sedan.
det första testet som gjordes på den gramnegativa kolonin var ett citratetest med hjälp av en vinkling av green Simmons Citratagar inokulerade genom att sätta tillväxt på toppen av vinkeln. Efter inkubation vinkeln hade vänt en blå färg, vilket resulterar i ett positivt test., Detta visade att bakterien använder citrat som sin primära kolkälla. Detta utesluter också Escherichia coli som en möjlighet för min gramnegativa bakterie. Nästa test var Kligler Strykjärn test.
Kligler-Järntestet bestod av att sticka en vinkling för att testa för minskning av svavel, jäsning av glukos och jäsning av laktos. Efter inkubation, hade toppen av vinkeln vänt en röd färg och botten var gul. Dessa resultat visade ett negativt resultat för vätesulfid eftersom det inte fanns någon svart i röret, vilket innebar att Proteus vulgaris inte längre var ett alternativ., Den röda färgen och den gula botten visade båda den positiva glukosjäsningen som utesluter Pseudomonas aeruginosa. Både Proteus vulgaris och Pseudomonas aeuginosa uteslöts av det negativa laktosresultatet. Nästa metod som användes var ett Urea-test.
detta test bestod i att omrör bakterietillväxten i ett rör av fenolrött och urea för att testa närvaron av syra. Efter inkubation var buljongen fortfarande en gul färg, vilket gav ett negativt resultat. Detta bekräftade att Enterobacter aerogenes var den gramnegativa bakterien. Ett Metylrött test utfördes också för att bekräfta detta svar.,
bakterietillväxten omrördes i MR-VP och proteinbuljongen för att bestämma om syra kunde produceras som ett resultat av glukosjäsning. Efter inkubation var buljongen en gul färg; ett negativt resultat. Detta bekräftade också att den okända bakterien var Enterobacter aerogenes.
det första testet som gjordes på den gram-positiva tillväxten var en gram-fläck. Efter att ha gjort proceduren med kristallviolett, jod, alkohol och safranin och tittat på bilden under mikroskopet sågs lila stavar., Formen är stavar minskat ner alternativen till Bacillus cereus och Bacillus subtilis. Nästa test som utfördes på denna tillväxt var ett kaseintest.
bakterietillväxt spreds på en mjölkagarplatta för att se om bakterien producerade kaseas och bryter ner kaseinet. Efter inkubation hade plattan vit tillväxt på den, vilket gav ett negativt resultat. Detta negativa resultat gjorde det möjligt att utesluta möjligheten attbacillus cereus. Detta innebar en bekräftelse på att den grampositiva bakterien var Bacillus subtilis. För att få en andra bekräftelse utfördes ett maltostest.,
bakterietillväxt omrördes i ett rör innehållande ett rött maltosmedium för att testa syra som ett resultat av maltosfjäsning. Efter inkubation var vätskan en gul färg, vilket gav ett positivt resultat för syraproduktion. Detta resultat bekräftade bakterien som Bacillus cereus. Detta var ett motsatt resultat än kaseintestet hade visat.
Efter att ha talat med labbprofessorn om resultaten bekräftades kaseintestet som att ha sanna resultat. Den okända grampositiva bakterien konfimerades som Bacillus cereus, och den gramnegativa är Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes ses vanligen som orsaken till infektioner i nedre luftvägarna, hud-och mjukdelsinfektioner, urinvägsinfektioner (uti), endokardit, intraabdominella infektioner, septisk artrit, osteomyelit, CNS-infektioner och Oftalmiska infektioner. (2) ett problem med Enterobacter-infektioner är att de ofta inte kan särskiljas från andra akuta bakterieinfektioner.
antimocribal behandling med ett enda medel används vanligtvis vid Enterobacter-infektioner., (3) Beta-laktamer, aminoglykosider, Flurokinoloner och Tritomprim-sulfametoxazon (tmp-SMZ) är alla antibiotika som används regelbundet för att behandla dessa typer av infektioner. (2) ett problem med detta är att när man får för mycket exponering för dessa läkemedelsresistens utvecklas ofta, vilket för närvarande har visat en stor fråga med dessa infektioner. På grund av dessa motstånd, kombinera antibiotika med olika strukturer används nu som en behandling för infektioner, kombinationsterapi.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver och Susie Gero. Lab Manual för allmän mikrobiologi., N. p.: n. p., 2011. Skriva.