TEXT
Clostridium difficile este un agent patogen anaerob care formează spori, asociat cu diaree sau colită ușoară până la viața în pericol (1, 2). C. colonizarea difficile crește odată cu durata șederii în spital după expunerea mediului la spori sau contactul cu o persoană infectată (3). Contaminarea și supraviețuirea sporilor C. difficile pe suprafețele neînsuflețite ale spitalului au fost raportate (4,5) și s-a dovedit a fi asociate cu transmiterea încrucișată (6, -8).,inactivarea și eradicarea sporilor Clostridium difficile reprezintă o provocare și au fost investigate mai multe tehnici relativ noi, cum ar fi vaporii de peroxid de hidrogen, radiațiile UV sau sistemele de plasmă gazoasă(5, 6, 9, 10). Validarea unor astfel de tehnici ar trebui să utilizeze metode optime de recuperare pentru a cuantifica mai bine uciderea sau eradicarea sporilor bacterieni.au fost utilizate o varietate de metode pentru detectarea C. difficile din mediul spitalicesc cu rezultate variabile (11, 12). Aici raportăm o evaluare a diferitelor metode pentru detectarea și recuperarea C., sporii difficile din materiale frecvent întâlnite în mediul spitalicesc.
(datele preliminare rezultate din acest studiu au fost prezentate ca poster la Congresul European de Microbiologie Clinică și Boli Infecțioase, Barcelona, Spania, Mai 2014.)
C. difficile tulpina de referință, ATCC 700057 (Cruinn Diagnosticare, Irlanda), și unul uncharacterized clinic izolat (Diagnostic de Laborator, Beaumont Hospital, Dublin, Irlanda) au fost incluse în studiu. O modificare a C. difficile sport protocolul de preparare descris de Chilton și colab. a fost folosit (13). Pe Scurt, C., difficile a fost inoculat în prereduced creier inima infuzie suplimentat cu extract de drojdie și l-cisteină, incubate anaerob la 37°C timp de 48 h, și răspândirea pe 10 Columbia agar sânge în plăci (Oxid, Marea Britanie), care au fost incubate anaerob la 37°C timp de 10 zile (14). Creșterea a fost colectată din plăci folosind o racletă celulară și suspendată în 1 ml soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)-etanol (50% ). Suspensiile au fost incubate la temperatura camerei timp de 1 h cu amestecare periodică., Suspensiile de spori au fost centrifugate timp de 10 min la 16,000 × g, iar peletele au fost resuspendate în 1 ml de PBS. Sport numerele și puritatea au fost determinate prin microscopie folosind Schaeffer și Fulton sport stain kit (Sigma-Aldrich, Irlanda). Suspensiile au fost ajustate la o concentrație de aproximativ 105 CFU/ml (o colonie este echivalentă cu un spor), iar diluțiile seriale 1:10 au fost preparate în PBS.
C., suspensiile de spori difficile (50 µl), variind între 105 și 10 CFU/ml, au fost adăugate în dublu exemplar la secțiuni de 25 cm2 din țesătură de saltea poliuretanică (Meditec Medical, Irlanda), polipropilenă (GoodFellow Cambridge, Ltd., Regatul Unit) și oțel inoxidabil, toate decontaminate conform descrierii anterioare (15). Suspensiile de spori aplicate pe suprafețe au fost uscate la aer peste 2 h.suprafețele au fost prelevate folosind tampoane de raion premoistened și tampoane de nylon flocked (Copan, Italia) și plasate în 3 ml PBS. Diluțiile seriale ale suspensiilor de tampon au fost inoculate pe plăcile selective C. difficile pre-presate—C., difficile agar bază CM0601 plus C. difficile supliment SR0096 (250 mg/litru d-cycloserine, 8 mg/litru cefoxitin) și 7% (vol/vol) defibrinated sânge de cal (SR0050)—furnizate de Oxid pentru determinarea numărului de UFC/ml. Plăcile Sterile de contact (VWR) au fost turnate în laborator cu agar selectiv C. difficile și aplicate pe fiecare secțiune timp de 20 s, asigurând un contact ferm cu suprafața. Plăcile subculturate din ambele tampoane și plăcile de contact au fost incubate peste noapte anaerob la 37°C. enumerarea coloniilor a fost efectuată în ziua următoare., Limita de detecție (LOD) a fost definită ca cea mai mică concentrație de spori aplicată care a fost detectată printr-o metodă specifică. Toate metodele au fost evaluate în mod independent vizând întreaga secțiune și au fost comparate abilitățile lor de a detecta și recupera sporii C. difficile. Analiza statistică a fost efectuată utilizând software-ul GraphPad Prism 5.00. Mijloacele a trei experimente independente ale procentului de recuperare pentru diferitele metode au fost analizate prin analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) și testul de comparație multiplă al lui Tukey.,în 1983, unul dintre primele rapoarte de comparare a metodelor de recuperare a sporilor de C. difficile de pe o suprafață de sticlă de mediu a arătat că de tampoane, padele adezive și plăci de contact, plăcile de contact au fost de departe cea mai eficientă metodă, detectarea sporilor la niveluri scăzute, fiind mai simplă de utilizat și relativ rapidă (16). De atunci, diferite metode, inclusiv tampoane, plăci de contact, mănuși și bureți, au fost utilizate pentru cercetarea și investigarea focarelor cu rezultate variabile. Aici, demonstrăm că plăcile de contact au obținut cea mai mare recuperare a C., sporii difficile (14% până la 92%) de pe diverse suprafețe, inclusiv materialul saltelei, polipropilena și oțelul inoxidabil, confirmând și extinzând rezultatele de la Buggy et al. (16) pentru recuperarea din sticlă. Recuperarea a fost, de asemenea, eficientă pentru tampoanele flocate (14% până la 76%), iar metoda cea mai puțin eficientă a fost tamponul de raion (7% până la 58%) (Fig. 1a și andB).B). Procentul de recuperare a fost direct proporțional cu mărimea inoculului inițial—adică, un inocul de 105 CFU/ml a permis plăcilor de contact să recupereze până la 92% și până la 14% pentru un inocul de 10 CFU/ml., Plăcile de Contact au fost, de asemenea, cele mai sensibile la detectarea sporilor la un inocul minim de 10 CFU/ml, în timp ce LOD a fost de 102 CFU/ml pentru tampoane flocate și 103 CFU/ml pentru tampoane raionale, dar acest lucru a fost valabil numai pentru izolatul clinic. Din punct de vedere statistic, plăci de contact au fost mai bune decât s-au înghesuit tampoane pe polipropilena pentru clinic izolat (P < 0.05) (Tabelul 1) și persistent superior raionul tampoane (P < 0.05 P < 0.001) (Tabelul 1), în timp ce nu a fost nici o diferență semnificativă între s-au înghesuit și raionale tampoane., Deși analiza statistică nu a evidențiat nicio diferență semnificativă în recuperările dintre toate suprafețele studiate, recuperările din materialul saltelei au fost ușor reduse în comparație cu cele din celelalte două suprafețe. În plus, nu s-a observat nicio diferență statistică între cele două izolate.recuperarea procentuală a sporilor Clostridium difficile ai tulpinii de referință (A) și a izolatului clinic (B) de pe trei suprafețe de mediu folosind plăci de contact, tampoane flocate și tampoane raionale., Barele de eroare reprezintă erorile standard ale mijloacelor (SEM) din cel puțin trei experimente independente (n ≥ 3).,”1″> valoarea P din analiza statistică a unui:
C., sporii difficile pot fi aruncați în mediu atât de pacienții asimptomatici, cât și de cei simptomatici și pot supraviețui până la 5 luni pe suprafețe neînsuflețite (17). Acestea rezistă efectelor bactericide ale majorității dezinfectanților spitalicești și ale majorității altor tehnici de decontaminare (18). Prin urmare, intervențiile trebuie monitorizate în camerele ocupate în prezent sau anterior de transportatorii C. difficile. Raportarea metodelor îmbunătățite în ceea ce privește viteza și sensibilitatea, cum ar fi placa de contact și tampoanele flocate raportate aici, oferă o estimare mai precisă a C., sarcina difficile comparativ cu metodele raportate anterior. Având în vedere că C. difficile este cel mai proeminent endospore astăzi în cadru de îngrijire a sănătății și prezintă un important risc de infectare a pacienților vulnerabili, există o nevoie tot mai mare pentru a cuantifica cu exactitate C. difficile spor de contaminare în mediul de îngrijire a sănătății. Aceasta ar fi în scopul evaluării noilor metode de decontaminare și corelarea nivelurilor de contaminare a mediului cu riscul de infecție și apariția focarelor., Cu toate acestea, îmbunătățirea metodelor de recuperare acceptate folosind materiale care reprezintă cele găsite în mediul spitalicesc este o condiție necesară.