Antagonism între penicilină și eritromicină împotriva Streptococcus pneumoniae in vitro și in vivo

Abstract

o combinație de antibiotice β-lactamice și macrolide este adesea recomandat pentru inițial tratamentul empiric al pneumoniei acute, în scopul de a obține de activitate împotriva celor mai importanți agenți patogeni. Teoretic, această combinație poate fi inoportună, deoarece agentul bacteriostatic poate antagoniza efectul agentului bactericid., În acest studiu, o posibilă interacțiune între penicilină și eritromicină a fost investigat in vitro si in vivo impotriva a patru tulpini clinice de Streptococcus pneumoniae cu Microfoane de penicilină variind de la 0.016 la 0,5 mg/L și de eritromicina la 0,25 la >128 mg/L. În vitro timp–ucide curbe au fost generate cu concentrații relevante clinic de penicilină (10 mg/L) și eritromicina (1 mg/L), fie individual sau în combinație. S-a observat Antagonism între penicilină și eritromicină pentru cele patru izolate., Interacțiunea in vivo a fost investigată în modelul peritonitei la șoarece. După inocularea intraperitoneală, penicilina și eritromicina au fost administrate individual sau în combinație. Pentru două dintre cele patru izolate, mortalitatea a fost semnificativ mai mare în grupurile tratate cu combinația de penicilină și eritromicină decât în grupurile tratate numai cu penicilină . Folosind modelul peritonitei de șoarece, curbele in vivo time–kill au arătat că există antagonism între eritromicină și penicilină pentru izolatul examinat., Antagonismul demonstrat in vitro și in vivo între penicilină și eritromicină sugerează că antibioticele β-lactamice și macrolidele nu trebuie administrate împreună decât dacă infecția pneumococică este exclusă.alegerea terapiei potrivite pentru pacienții cu pneumonie este o provocare, deoarece etiologia nu poate fi prezisă doar pe baza simptomelor și a constatărilor clinice, iar diagnosticul microbiologic final nu a fost stabilit de obicei înainte de începerea tratamentului., Streptococcus pneumoniae este organismul cel mai frecvent izolat în pneumonia dobândită în comunitate, în special la copiii mici și pacienții mai în vârstă, iar infecția are încă o mortalitate ridicată.1 cu toate acestea, infecțiile cu Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae și Legionella spp. sunt,de asemenea, comune2, 3 și aceste organisme nu sunt de obicei sensibile la agenții antimicrobieni utilizați în mod obișnuit pentru tratamentul pneumococilor. Prin urmare, penicilina sau alte β-lactame sunt adesea recomandate în asociere cu eritromicina pentru tratamentul empiric inițial al pneumoniei acute de etiologie necunoscută.,4

anterior, sinergia in vitro și in vivo între antibioticele β-lactamice, cum ar fi penicilina, ampicilina, piperacilina și cefuroxima, a fost demonstrată atunci când a fost combinată cu gentamicina împotriva S. pneumoniae.Antagonismul 5,6 in vitro a fost demonstrat pentru combinații precum ampicilina și cloramfenicolul împotriva Haemophilus influenzae7 și împotriva streptococilor de grup B.,8 S-a raportat antagonism clinic important între penicilină și tetraciclină împotriva pneumococilor,9,10 penicilină și eritromicină împotriva streptococilor de grup A11 și ampicilină, streptomicină și cloramfenicol în meningita bacteriană acută.12 Teoretic, tratamentul inițial empiric al pneumoniei cu o combinație de agent β-lactamic și macrolidă poate fi, de asemenea, inoportun în cazul infecției pneumococice, deoarece macrolida bacteriostatică poate antagoniza efectul bactericid al β-lactamului.,în studiul de față am investigat posibila interacțiune dintre penicilină și eritromicină in vitro împotriva a patru izolate clinice de pneumococi cu diverse sensibilități la penicilină și eritromicină.6,13 am studiat interacțiunile in vivo în modelul peritonitei de șoarece.6

Materiale și metode

Bacterii, mass-media și condițiile de creștere pentru mouse-ul peritonita model

suspensii Bacteriene pentru a fi folosit ca inocul pentru in vitro și in vivo au fost preparate peste noapte culturi pe 5% agar sânge plăci realizate din stoc congelat culturi., Inoculul pentru experimentele la șoarece a fost preparat imediat înainte de inoculare prin suspendarea coloniilor în bulion steril Mueller-Hinton (Statens Serum Institut, Copenhaga, Danemarca) și a fost ajustat la o densitate optică la 540 nm de 0,5–1,0, dând o concentrație de C. 108 cfu/mL, așa cum s-a descris anterior.13 pentru fiecare experiment, Mărimea inoculului a fost determinată după efectuarea diluțiilor de 10 ori în bulionul Mueller-Hinton, din care 20 µL au fost placate pe două plăci de agar de sânge de 5% în pete în dublu exemplar, cu numărarea ulterioară a coloniilor după incubare peste noapte la 35°C în aer., Mucină (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, SUA), un extract enzimatic din stomacul porcin, a fost utilizat ca adjuvant pentru inocularea șoarecilor și a fost preparat ca soluție stoc 10% (g/v) în soluție salină.13 imediat înainte de inoculare, soluțiile de mucină au fost diluate 1:1 cu suspensii pneumococice, dând o concentrație finală de mucină de 5% (g/v).medicamentele utilizate au fost penicilina G (Leo Pharmaceutical Co., Ballerup, Danemarca) și eritromicină (Sigma Chemical Co.). Penicilina G a fost diluată în soluție salină tamponată cu fosfat cu pH 6,5 ± 0.,1, iar eritromicina a fost diluată în 9 mL apă sterilă și 1 mL alcool 96%; pH-ul soluției de eritromicină a fost ajustat la între 6,7 și 7,3.

MICs și MBCs

MICs au fost determinate prin metoda de macrodiluție a bulionului în tuburi de sticlă. Toate testele au fost efectuate în duplicat, iar rezultatele au fost citite după 20 de ore de incubare la 35°C. bulion macrodilution metodă în tuburi de sticlă a fost realizată cu Mueller–Hinton bulion (Statens Serum Institut) la care 5% sânge de oaie a fost adăugată; un inocul de 106 ufc/mL a fost folosit., Penicilina G a fost diluată în două etape în bulionul Mueller-Hinton pentru a obține concentrații de 0,004–64 mg/L. cea mai mică concentrație de antibiotic la care nu a existat o creștere vizibilă a fost luată ca MIC. Am folosit S. pneumoniae ATCC 49619 ca tulpină de control pentru testele MIC.

MBC a fost determinată de subcultură de tuburi cu nici o creștere vizibilă după determinarea CMI. Din fiecare tub, 100 µL a fost cultivat pe plăci de agar care conțin penicilinază (Leo Pharmaceutical Co.) 1000 UI/placă și colonii au fost numărate după 18-24 ore de incubare la 35°C., CMB a fost definită ca fiind cea mai mică concentrație de penicilină care a redus inoculul cu ≥99,9%. Toate testele au fost efectuate în două exemplare.pentru a studia interacțiunile posibile între penicilină și eritromicină, s–au efectuat experimente de distrugere în timp cu concentrații relevante clinic de penicilină și eritromicină de 10, respectiv 1 mg/L., Înainte de experimentele time–kill, izolatul 86 (rezistent la eritromicină) a fost cultivat pe plăci de agar de sânge 5% conținând eritromicină 4 mg/L (inducerea rezistenței la eritromicină) și pe plăci fără eritromicină (fără inducerea rezistenței la eritromicină). Pneumococii (106 cfu / mL) au fost incubați în 20 mL de bulion Mueller–Hinton la 35°C cu agitare. Pentru a asigura creșterea exponențială a bacteriilor, antibioticele au fost adăugate mai întâi după 1 h de incubație. Probele au fost luate înainte de adăugarea de antibiotice și 1, 2, 3 și 5 ore mai târziu., Curbele de timp-kill nu au fost extinse în continuare, deoarece autoliza a început să apară după 5-6 ore pentru toate izolatele. Numărul de cfu / mL a fost determinat după efectuarea diluțiilor adecvate și 100 µL a fost răspândit pe plăcile de agar din sânge de 5%. Pentru probele nediluate, s-au utilizat plăci de agar care conțin penicilinază (ca mai sus). Coloniile au fost numărate după 20 de ore de incubație la 35°C. toate experimentele de ucidere a timpului au fost efectuate în două exemplare. Variația numărului de colonii în aceleași puncte de timp pentru experimente repetate a fost < 0, 5 log10 pe mL., Antagonismul a fost definit ca un mod semnificativ a scăzut uciderea efect (de exemplu >0.5 log10 ufc/mL la 1 la 5 sec după adăugarea de medicamente) de o combinație de penicilină și eritromicină comparativ cu penicilina singur.14

în experimentele time–kill, am măsurat posibile modificări ale pH–ului în baloane cu benzi de testare a pH-ului (interval de pH 4.5-10.0; gradat în unități de pH 0.5; Sigma Chemical Co.).

experimente pe animale (model de peritonită de șoarece)

toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul Național de etică animală danez., Femela de șoarece ssc cf-1 (Statens Serum Institut) în vârstă de 8-12 săptămâni, greutate 28-30 g au fost utilizate, în grupuri de cinci până la 36 de șoareci. În general, am folosit 88 de șoareci pentru izolatul 73, 89 de șoareci pentru izolatul 75, 88 de șoareci pentru izolatul 86 (fără inducție), 94 de șoareci pentru izolatul 86 (indus cu eritromicină ca și pentru studiile de timp) și 89 de șoareci pentru izolatul 93. Șoarecii au fost ținuți în cuști cu cinci până la șapte șoareci pe cușcă; li sa permis accesul liber la hrană și apă. Suspensia pneumococică (0,5 mL) a fost inoculată intraperitoneal printr-o seringă de calibru 25., Inoculul conținea 106 cfu/mL cu 5% (m / v) mucină în bulion Mueller–Hinton. Folosind o astfel de inoculă, există C. 100% mortalitate la șoarecii netratați, care cedează 36-48 ore după inoculare. Antibioticele au fost administrate subcutanat în regiunea gâtului într-un volum de 0,25 mL pe doză.13 S-a utilizat următoarea schemă: eritromicina a fost administrată la 90 min după inocularea bacteriană, iar în grupul combinat eritromicina a fost administrată la 90 min după inocularea bacteriană și penicilina 60 min mai târziu. Penicilina a fost administrată singură la 150 de minute după inocularea bacteriană., Șoarecii de Control au primit soluție salină sterilă la 90 min după inocularea bacteriană.

Doze de penicilină și eritromicină au fost alese în funcție de Deal ecuația sigmoid doză–efect curbe, astfel ca penicilina ar fi de așteptat să conducă la c. 95% supraviețuire, în timp ce eritromicina singur a fost de așteptat pentru a preveni mortalitatea în 10% din șoareci. Șoarecii infectați cu izolatul 73 au fost tratați cu penicilină 10 mg / șoarece și/sau eritromicină 100 µg / șoarece. Șoarecii infectați cu izolatul 75 au fost tratați cu penicilină 2 mg / șoarece și/sau eritromicină 100 µg / șoarece., Șoarecii infectați cu izolatul 86 (neindus) au fost tratați cu penicilină 150 µg / șoarece și/sau eritromicină 100 µg / șoarece. Șoarecii infectați cu izolatul 86 (crescuți în prezența concentrațiilor sub-inhibitorii de eritromicină înainte de inoculare) au fost tratați cu penicilină 150 µg/șoarece și/sau eritromicină 100 µg/șoarece. Șoarecii infectați cu izolatul 93 au fost tratați cu penicilină 400 µg / șoarece și/ sau eritromicină 100 µg / șoarece.probele de sânge au fost obținute prin tăieturi orbitale după anestezia șoarecilor cu CO2., Șoarecii au fost uciși și spălările peritoneale au fost apoi efectuate prin injectarea a 2 mL de soluție salină sterilă intraperitoneal, masarea abdomenului și deschiderea peritoneului pentru a colecta lichidul.15 probe de sânge și lichid peritoneal au fost imediat diluate și 0,1 mL au fost placate pe plăci de agar de sânge 5%.in vivo au fost construite curbe de timp–kill pentru unul dintre izolatele de pneumococ (numărul 93), care au prezentat antagonism semnificativ in vivo. Pneumococi în peritoneu și sânge au fost obținuți după inocularea intraperitoneală a 36 de șoareci cu 5,0 × 106 cfu/mL suspensie bacteriană., La zece minute, 80 min, 140 min, 3 h și 5 h după provocare, au fost uciși grupuri de trei șoareci de control (inoculați cu soluție salină sterilă). La 140 min, 3 h și 5 h după provocare, grupuri de trei șoareci tratați cu eritromicină 90 min după provocare au fost uciși. La 3 ore și 5 ore după provocare, grupuri de trei șoareci tratați fie cu combinația de penicilină și eritromicină, fie cu penicilină în monoterapie la 150 de minute după infecția intraperitoneală au fost uciși. S-au prelevat probe de sânge și peritoneale pentru cultura cantitativă a pneumococilor.,

Determinarea ED50 de penicilină pentru individ pneumococi

ED50, doza unică oferind protecție la 50% din șoareci, pentru fiecare pneumococ izola fost determinată prin tratarea grupuri de cinci șoareci cu dublarea dozelor de antibiotice; de supraviețuire a șoarecilor a fost observată timp de 7 zile. Un grup de cinci șoareci tratați cu 0,9% NaCl a fost inclus în fiecare experiment ca un control al letalității infecției. Pentru fiecare izola ED50 a fost calculată prin metoda Reed & Muench16 și de Deal ecuația (GraphPad Prism; GraphPad Software, Inc.,, San Diego, CA, SUA). Nu am efectuat niciun experiment pentru a calcula eritromicina ED50s, deoarece acest lucru a fost făcut anterior pentru tulpini cu MICs similare în laboratorul nostru.17 am ales doze de penicilină care ar fi de așteptat să conducă la o supraviețuire estimată de 95% a șoarecilor și doze de eritromicină care ar fi de așteptat să conducă la o supraviețuire estimată de 10% a șoarecilor. Pentru terapia combinată, antibioticele au fost administrate în injecții separate.testul exact al lui Fisher pentru datele categorice a fost utilizat, cu un nivel de semnificație de 5% față-verso.,

rezultate

MICs de penicilină și eritromicină și ED50s de penicilină pentru cele patru tulpini pneumococice sunt prezentate în tabel. Infecția letală a fost obținută cu trei din patru izolate. Cu toate acestea, ED50 de penicilină pentru izolatul 86 a trebuit să fie estimat, deoarece a fost posibilă doar atingerea mortalității 90% în experimentele de determinare ED50.rezultatele experimentelor time-kill sunt prezentate în Figura 1., Prin această metodă, toate izolatele au prezentat antagonism in vitro pentru combinația de penicilină și eritromicină (figura 1a–c și e), deoarece eritromicina a inhibat aproape complet efectul bactericid al penicilinei. Cu toate acestea, atunci când rezistența la eritromicină a fost indusă prin creșterea izolatului rezistent la eritromicină (numărul 86) pe plăcile de agar din sânge conținând eritromicină 4 mg/L înainte de studiul time–kill, antagonismul eritromicinei a fost neutralizat (figura 1D).pentru toate tulpinile izolate, efectul de ucidere in vitro al penicilinei și penicilinei plus eritromicină a crescut cu timpul., Scăderea UFC observată în baloanele de control în unele experimente s-a datorat autolizei, o observație comună cu pneumococi. În toate experimentele, eritromicina singură a prezentat un efect de ucidere mai mic decât penicilina și combinația. Nu s-a observat niciun efect de ucidere în timpul celor 5 ore de incubare în tulpina rezistentă la eritromicină, incubată sau nu cu eritromicină. Nu s-au observat modificări ale pH-ului în baloanele care conțin unul sau ambele antibiotice: pH-ul a fost de 7, 5 După 0, 1, 2, 3, 4 și 5 ore de incubație.,în modelul peritonitei de șoarece, am constatat că tratamentul combinat al penicilinei și eritromicinei a dus la antagonism la șoarecii provocați cu izolatele 75 și 93 (figura 2b și e). Acolo a fost semnificativ mai mare a mortalității la șoarecii tratați cu eritromicină 60 min înainte de penicilină decât la șoarecii tratați cu penicilină singur (izolat 75: mortalitatea 32/36 și 3/12, respectiv, P < 0.05; izola 93: mortalitatea 24/36 și 3/12, respectiv, P < 0.05) (Figura 2)., În celelalte două izolate, mortalitatea la șoareci dat ambele antibiotice a fost similară cu cea la șoareci dat penicilina singur (Figura 2a și d). Toți șoarecii de control au murit atunci când au fost infectați intraperitoneal cu pneumococi, cu excepția șoarecilor infectați cu izolatul 86, pentru care mortalitatea a fost de 80-90%. Chiar și atunci când inoculul bacterian al izolatului 86 a fost crescut la 108 cfu/mL, nu a existat o mortalitate de 100%.cele mai scăzute rate de mortalitate au fost găsite la acele grupuri de șoareci tratați cu penicilină în monoterapie sau eritromicină plus penicilină în combinație după provocarea bacteriană., Cea mai mare mortalitate a fost observată la șoarecii de control sau la șoarecii tratați cu eritromicină în monoterapie la 90 de minute după infecția pneumococică (Figura 2). Pentru a izola 86 am constatat că tratamentul combinat prevăzute în mod semnificativ mai bună protecție împotriva infecției pneumococice decât tratamentul cu penicilină singur după 150 min (32/35 șoarecii din primul grup au supraviețuit în comparație cu 6/12 în cele din urmă; P = 0,009) sau eritromicină singur (32/35 și 16/36 de supraviețuire, respectiv; P = 0,005) (Figura 2c)., Când rezistența la eritromicină a fost indusă înainte de inocularea cu izolatul 86, tratamentul combinat a oferit o protecție semnificativ mai bună decât eritromicina în monoterapie (31/36 șoareci din primul grup au supraviețuit comparativ cu 5/36 în cel de-al doilea; P = 0,005).curbele in vivo time-kill pentru izolatul 93 au arătat o creștere de 1-2 log a creșterii bacteriilor în sânge la 80 min după provocare, comparativ cu 10 min după provocare la șoarecii de control (Figura 3), în timp ce numărul de pneumococi în spălările peritoneale la 80 min a fost același cu cel de 10 min după inoculare., Numărul de pneumococi cultivate din sânge și spălări peritoneale la diferite momente de timp în diferite grupuri de tratament a fost aproape paralel, cu 1-2 log mai mare cfu/mL în spălări peritoneale decât în sânge. Uciderea bacteriilor a fost cea mai eficientă în grupul tratat cu penicilină, cu o scădere a creșterii bacteriene de 3 bușteni și, respectiv, 4 bușteni în sânge și spălări peritoneale. Terapia asociată a arătat un efect similar asupra creșterii bacteriene ca atunci când eritromicina a fost administrată singură (antagonism).,interacțiunea dintre eritromicină și penicilină împotriva pneumococilor a fost studiată cu patru izolate cu susceptibilități diferite la penicilină sau eritromicină. Curbele in vitro de timp-kill pentru izolatul sensibil la eritromicină (figura 1A, b și e) au arătat un antagonism clar între cele două medicamente, adică prezența eritromicinei a inhibat complet activitatea bactericidă a penicilinei, iar curba rezultată a fost similară cu activitatea inhibitorie lentă a eritromicinei în monoterapie., Inhibarea efectului penicilinei (care este acidă) s-ar fi putut datora creșterii pH-ului cauzat de eritromicină (care este alcalină). Cu toate acestea, pH măsurători în recipiente cu o combinatie de droguri s-au evidențiat modificări de pH. Antagoniste efect s-a văzut, de asemenea, în uninduced eritromicina pneumococ rezistente la izola (86), în timp ce inducția expresiei de eritromicină genă de rezistență a împiedicat efectul inhibitor de eritromicină și activitate antagonistă la penicilină., Aceste rezultate indică în mod clar că activitatea inhibitorie a macrolidei asupra creșterii sau diviziunii celulare a bacteriilor este principalul motiv pentru antagonismul împotriva penicilinei, care poate acționa numai asupra bacteriilor care se află în faza de creștere și produc un perete celular.15 Această activitate bacteriostatică a eritromicinei și efectul său inhibitor asupra penicilinei au fost clar evidente în experimentele in vivo.,

În scopul de a evalua posibila interacțiune între cele două medicamente in vivo, am ales mouse-ul peritonita model, care a fost anterior utile în demonstrarea interacțiunii dintre antibiotice,6 și care, de asemenea, permite o pentru a studia droguri de acțiune asupra bacteriilor prin efectuarea in vivo timp–ucide experimente pe organisme în peritoneu și/sau sânge.17 doze de penicilină și eritromicină au fost alese în conformitate cu ecuația Hill curbele sigmoid doză–efect, astfel încât penicilina singur ar fi de așteptat să conducă la c., 95% supraviețuire, în timp ce eritromicina singură ar putea preveni mortalitatea doar la 10% dintre șoareci. Cu aceste doze, un efect al dozei de eritromicină fără influența unei doze ulterioare de penicilină ar duce la o mortalitate determinată numai de activitatea macrolidei. Activitatea antagonistă a celor două medicamente a fost confirmată ulterior, prin curbele time–kill in vivo, ca urmare a aceleiași activități inhibitoare de creștere a eritromicinei, demonstrată in vitro., Importanța inducției eritromicina rezistență la eritromicină-rezistent izola (numărul 86) a fost demonstrat, de asemenea, in vivo: inducție cu eritromicină a scăzut semnificativ supraviețuirea în ciuda eritromicina tratament comparativ cu supraviețuirea următoarele eritromicina tratamentul uninduced pneumococi.

cu un izolat sensibil la eritromicină (numărul 73), nu a fost posibil să se manifeste antagonism in vivo cu metoda utilizată. Pot exista mai multe explicații pentru acest lucru., Posibilitatea ca nu toți pneumococii să răspundă într-un mod similar cu cele două medicamente utilizate pare puțin probabilă, mai ales atunci când activitatea a fost la fel de demonstrabilă in vitro. Este mult mai probabil ca situația in vivo este diferit pentru diferite tulpini, de exemplu, virulența pneumoccci depinde de o serie de factori care sunt greu de standardizat, cum ar fi dimensiunea și tipul de capsulă, alți factori de virulență conectat cu membrana sau toxine, sau creșterea comportamentului in vivo, care este foarte variabilă pentru pneumococ., Este probabil că ne-ar fi demonstrat antagonismul in vivo cu izola 73 dacă am avut ‘titrate’ inocul și calendarul de două medicamente în raport cu celălalt, dar acest lucru ar necesita un număr excesiv de animale., Clare demonstrație de interacțiune între cele două medicamente împotriva a cel puțin două tulpinile de pneumococ, atât in vitro cât și in vivo, care a fost demonstrat de creșterea mortalității, precum și de modificările în vivo timp–ucide curbe, numeroase dovezi pentru un efect, și ar trebui să avertizeze clinicieni împotriva utilizării acestor două medicamente împreună pentru a trata infecțiile pneumococice.

semnificația clinică a antagonismului între un medicament bactericid, cum ar fi penicilina sau ampicilina și un inhibitor de sinteză a proteinelor bacteriostatice, de exemplu., tetraciclina, eritromicina sau cloramfenicolul au fost demonstrate în mai multe studii.Antagonismul 7-12, 18 a fost confirmat in vivo într-un studiu experimental cu penicilină și cloramfenicol împotriva meningitei pneumococice la câini.19 în ciuda acestei experiențe timpurii cu astfel de combinații de medicamente, combinația de penicilină și eritromicină este recomandată chiar și în manualele standard ca tratament empiric în pneumonia de etiologie necunoscută.4 combinația de medicamente este aleasă în special pentru a cuprinde pneumococi și Legionella spp.,, care sunt considerate a fi agenți etiologici importanți și mortali în pneumonie. Este dificil de știut dacă rezultatele prezentului studiu sunt direct aplicabile situației clinice. În situația clinică, dozele sub-optime de eritromicină nu ar fi de obicei utilizate, dar cu acțiune inhibată a penicilinei, poate fi necesar să se bazeze pe efectul bacteriostatic al eritromicinei, dacă pneumococul este susceptibil de eritromicină. Nu se cunoaște dacă efectul inductibil al eritromicinei demonstrat în prezentul studiu are loc și în focalizarea pneumonică la om.,în concluzie, studiul de față a demonstrat antagonism între penicilină și eritromicină față de trei izolate de pneumococi sensibile la eritromicină in vitro. Acest antagonism a apărut, de asemenea, cu două dintre izolate in vivo într-un model experimental simplu cu șoareci. Când rezistența la eritromicină nu a fost indusă, antagonismul a fost demonstrat in vitro și pentru izolatul pneumococic rezistent la eritromicină, dar inducerea cu eritromicină înainte de inoculare a eliminat efectul antagonist.

expert asistență tehnică de Anja Borum și Jytte Marca Andersen este foarte apreciat., Datele preliminare prezentate în forma finală în acest manuscris au fost prezentate la al Treizeci și Șaptelea Interscience Conferință pe Agenți Antimicrobieni și Chimioterapie, Toronto, Ontario, Canada, 28 septembrie–1 octombrie 1, 1997 (poster O-29).