tekst
Clostridium difficile is een sporenvormende anaerobe nosocomiale pathogeen geassocieerd met lichte tot levensbedreigende diarree of colitis (1, 2). C. difficile kolonisatie neemt toe met de duur van het verblijf in het ziekenhuis na blootstelling van het milieu aan sporen of contact met een geïnfecteerde persoon (3). Contaminatie en overleving van C. difficile sporen op levenloze oppervlakken in ziekenhuizen zijn gemeld (4, 5) en blijken geassocieerd te zijn met kruisoverdracht (6,-8).,
inactivatie en eradicatie van Clostridium difficile sporen zijn een uitdaging, en verschillende relatief nieuwe technieken zijn onderzocht, zoals waterstofperoxide damp, UV-straling, of gasvormige plasma systemen (5, 6, 9, 10). Validatie van dergelijke technieken moeten optimale herstelmethoden gebruiken om bacteriële sporen doden of uitroeiing beter te kwantificeren.
Er zijn verschillende methoden gebruikt om C. difficile uit de ziekenhuisomgeving op te sporen met variabele resultaten (11, 12). Hier rapporteren we een evaluatie van verschillende methoden om C te detecteren en te herstellen., difficile sporen van materialen vaak gevonden in het ziekenhuis omgeving.
(Preliminary data arising from this study were presented as a poster at the European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Barcelona, Spain, May 2014.)
één C. difficile referentiestam, ATCC 700057 (Cruinn Diagnostics, Ierland), en één niet-gekarakteriseerd klinisch isolaat (diagnostisch laboratorium, Beaumont Hospital, Dublin, Ierland) werden in de studie opgenomen. Een wijziging van de C. difficile sporenvoorbereiding protocol beschreven door Chilton et al. werd gebruikt (13). Kort, C., difficile werd geïnoculeerd in een vooraf gereduceerde hersen-hartinfusie aangevuld met gistextract en l-cysteïne, gedurende 48 uur anaeroob geïncubeerd bij 37°C en verspreid op 10 Columbia-agarplaten (Oxoid, Verenigd Koninkrijk), die gedurende 10 dagen anaeroob bij 37°C werden geïncubeerd (14). De groei werd verzameld uit de platen met behulp van een celschraper en gesuspendeerd in 1 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)-ethanol (50% ). De suspensies werden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met periodieke menging., Sporensuspensies werden gedurende 10 minuten gecentrifugeerd bij 16.000 × g, en de pellets werden geresuspendeerd in 1 ml PBS. Sporen aantallen en zuiverheid werden bepaald door microscopie met behulp van de Schaeffer en Fulton sporen vlek kit (Sigma-Aldrich, Ierland). Suspensies werden aangepast tot een concentratie van ongeveer 105 CFU/ml (één kolonie is gelijk aan één spore), en seriële 1:10 verdunningen werden bereid in PBS.
C., difficile sporensuspensies (50 µl), variërend van 105 tot 10 CFU/ml, werden in duplo toegevoegd aan 25 cm2 secties van polyurethaan matras stof (Meditec Medical, Ierland), polypropyleen (GoodFellow Cambridge, Ltd., Verenigd Koninkrijk) en roestvrij staal, alle ontsmet zoals eerder beschreven (15). Sporensuspensies die op de oppervlakken werden aangebracht, werden gedurende 2 uur aan de lucht gedroogd. de oppervlakken werden bemonsterd met premoistened rayon swabs en nylon flocked swabs (Copan, Italië) en geplaatst in 3 ml PBS. Seriële verdunningen van de swab suspensies werden geïnoculeerd op prepured C. difficile selectieve platen-C., difficile agar base CM0601 plus C. difficile supplement SR0096 (250 mg/liter d-cycloserine, 8 mg/liter cefoxitine) en 7% (vol/vol) defibrinated horse blood (SR0050)—verstrekt door Oxoid voor telling van CFU/ml. Steriele contactplaten (VWR) werden in het laboratorium met C difficile selectieve agar gegoten en gedurende 20 s op elke sectie aangebracht, waardoor stevig contact met het oppervlak werd gewaarborgd. Subcultuurplaten van zowel swabs als contactplaten werden ‘ s nachts anaeroob geïncubeerd bij 37°C. De Volgende Dag werd de kolonie geteld., De detectielimiet (LOD) werd gedefinieerd als de laagste toegepaste sporenconcentratie die met een specifieke methode werd gedetecteerd. Alle methoden werden onafhankelijk beoordeeld gericht op de hele sectie, en hun mogelijkheden om C. difficile sporen te detecteren en te herstellen werden vergeleken. Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van GraphPad Prism 5.00 software. De middelen van drie onafhankelijke experimenten van het percentage van terugwinning voor de verschillende methodes werden geanalyseerd door one-way analysis of variance (ANOVA) en Tukey ‘ s multiple-comparison test.,in 1983 bleek uit een van de eerste rapporten waarin methoden voor de terugwinning van C. difficile-sporen uit een omgevingsglasoppervlak werden vergeleken dat bij wattenstaafjes, zelfklevende peddels en contactplaten contactplaten veruit de meest efficiënte methode waren, omdat ze sporen op lage niveaus detecteerden, eenvoudiger te gebruiken en relatief snel waren (16). Sindsdien zijn verschillende methoden, waaronder swabs, contactplaten, handschoenen en sponzen, gebruikt voor onderzoek en uitbraak onderzoeken met variabele resultaten. Hier tonen we aan dat contactplaten de hoogste recuperatie van C., difficile sporen (14% tot 92%) van verschillende oppervlakken, met inbegrip van het matrasmateriaal, polypropyleen, en roestvrij staal, bevestiging en uitbreiding van de resultaten van Buggy et al. (16) voor terugwinning uit glas. De recuperatie was ook efficiënt voor gevlokte swabs (14% tot 76%), en de minst efficiënte methode was de rayon swabs (7% tot 58%) (Fig. 1A en andB).B). Het recuperatiepercentage was recht evenredig met de grootte van het initiële entmateriaal, d.w.z. met een entmateriaal van 105 CFU/ml konden contactplaten 92% en slechts 14% terugwinnen voor een entmateriaal van 10 CFU/ml., Contactplaten waren ook het gevoeligst bij het detecteren van sporen bij een minimum entmateriaal van 10 CFU/ml, terwijl de LOD 102 CFU/ml was voor gevlokte swabs en 103 CFU/ml voor rayon swabs, maar dit gold alleen voor het klinische isolaat. Statistisch gezien waren contactplaten beter dan gevlokte swabs op polypropyleen voor het klinische isolaat (p < 0,05) (Tabel 1) en aanhoudend superieur aan rayon swabs (P < 0,05 tot P < 0,001) (Tabel 1), terwijl er geen significant verschil was tussen gevlokte en rayon swabs., Hoewel statistische analyse geen significant verschil aan het licht bracht in de terugvinding tussen alle onderzochte oppervlakken, waren de terugvinding van het matrasmateriaal enigszins verminderd in vergelijking met die van de andere twee oppervlakken. Bovendien werd geen statistisch verschil waargenomen tussen de twee isolaten.
percentage recovery van Clostridium difficile sporen van de referentiestam (A) en klinisch isolaat (B) van drie omgevingsoppervlakken met behulp van contactplaten, gevlokte swabs en rayon swabs., Foutbalken vertegenwoordigen de standaardfouten van de gemiddelden (SEM) van ten minste drie onafhankelijke experimenten (n ≥ 3).,”1″> P-waarde uit de statistische analyse van de ofa:
C., difficile sporen kunnen zowel door asymptomatische als symptomatische patiënten in de omgeving worden afgevoerd en kunnen tot 5 maanden overleven op levenloze oppervlakken (17). Ze zijn bestand tegen de bactericide effecten van de meeste ziekenhuis ontsmettingsmiddelen en de meeste andere ontsmettingstechnieken (18). Daarom moeten interventies worden gemonitord in ruimten die momenteel of eerder worden bezet door dragers van C. difficile. De rapportage van verbeterde methoden in termen van snelheid en gevoeligheid, zoals de hier gerapporteerde contactplaat en gevlokte swabs, geeft een nauwkeurigere schatting van de C., moeilijk last in vergelijking met eerder gerapporteerde methoden. Gezien het feit dat C. difficile is de meest prominente endospore in de huidige gezondheidszorg setting en presenteert een significant infectierisico voor kwetsbare patiënten, is er een groeiende behoefte om nauwkeurig te kwantificeren C. difficile sporencontaminatie in de gezondheidszorg omgeving. Dit is bedoeld om nieuwe methoden voor decontaminatie te beoordelen en het niveau van milieuverontreiniging te relateren aan het infectierisico en het optreden van uitbraken., Niettemin is het verbeteren van geaccepteerde herstelmethoden met behulp van materialen die overeenkomen met die in de ziekenhuisomgeving een noodzakelijke voorwaarde.