Door CPR Louisville op 1 juli 2014 | 6:06 pm | Print
ONBEKEND LAB-RAPPORT
Onbekend Aantal 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Algemene Microbiologie I
in het Voorjaar van 2014
INLEIDING
het Identificeren en begrijpen van micro-organismen is het belangrijk om meerdere redenen is dat bacteriën zijn een belangrijke oorzaak van ziekte bij de mens en ziekte., In staat zijn om meer infecties en ziekten te genezen kan worden gedaan door goed geïnformeerd te zijn over verschillende micro-organismen en hoe ze werken in verschillende omgevingen. Deze studie van het identificeren van onbekende bacteriën werd gedaan door diverse technieken te gebruiken die in de klasse van het microbiologielaboratorium tot dit punt worden gebruikt.
materialen en methoden
een reageerbuis met bouillon met onbekende bacteriën met het nummer 105 werd ontvangen van de professor in het microbiologisch laboratorium. Een verscheidenheid van procedures geleerd in de klasse van het microbiologisch laboratorium werden uitgevoerd op de onbekende bacteriën., Deze tests werden uitgevoerd volgens de instructies in de microbiologie cursus lab manual door Mcdonald, Thoele, Salsgiver, en Gero (1), Tenzij anders vermeld.
de eerste vereiste methode was de quadrant streak-methode. Dit werd gedaan om de twee onbekende bacteriën op een voedingsagarplaat te isoleren door gebruik te maken van een inoculerende lus, Bunsenbrander en de bouillon. Vervolgens werd deze plaat bij kamertemperatuur geïncubeerd om te proberen twee afzonderlijke kolonies te bepalen., De groei van een kolonie op deze plaat werd toen getest voor zijn Gramrespons door stappen van gramkleuring gebruikend jodium, kristalviolet, alcohol, en safranin om één enkel type van bacterie te vinden. Observatie onder een microscoop herstelde de gramrespons van de bacterie uit de kolonie. In Tabel 1 worden de genomen procedures, de gebruikte materialen, de incubatietemperatuur en de Geregistreerde resultaten voor de eerste bacterie vermeld. Inbegrepen in deze tests zijn Citraat, Glucose en Lactose fermentatie, zwavel reductie door middel van een Kliger ijzer test, ureum test, en Methyl rode test.,vervolgens werden de nodige stappen ondernomen om een Simmon ‘ s Citraat test uit te voeren op de eerste bacteriële kolonie met behulp van een inoculerende lus gesteriliseerd door de vlam van een Bunsenbrander om de groei op de groene agar schuine. De incubatie van die buis werd vervolgens gedurende vijf dagen bij een temperatuur van 35°C uitgevoerd. Het bepalen van het gebruik van citraat als enige bron van koolstof door de bacterie was de reden van deze test.
een Kligler-Ijzertest werd uitgevoerd met behulp van groei uit de Eerste kolonie om de opties van de mogelijke bacterie te beperken door de fermentatiemogelijkheden voor Glucose en Lactose te bepalen., Het medium werd gestoken door een vlam gesteriliseerde inoculerende naald met bacteriegroei erop en geïncubeerd bij 35°C gedurende vijf dagen.
een Ureumtest was de volgende test die werd uitgevoerd op deze gramnegatieve kolonie. Dit werd gedaan door een deel van de bacterie te roeren in de pH-indicator fenolrood en ureum medium vlam gesteriliseerd inoculerende lus. Daarna werd het gedurende 48 uur bij een temperatuur van 35°C geïncubeerd. Het doel van deze test was om te ontdekken of de bacterie een zuur kon produceren., Een Methylrode test werd ook uitgevoerd op de gramnegatieve bacteriën om te bepalen of de bacterie zuur produceerde na het fermenteren van glucose. Een vlam gesteriliseerd inoculerende lus met bacteriegroei op het werd geroerd rond de buis van het eiwit en glucose MR-VP medium en geïncubeerd bij 35°C gedurende achtenveertig uur. Deze tests werden uitgevoerd om het eindresultaat van de onbekende gramnegatieve bacterie te bevestigen.
een tweede voedingsagarplaat werd gestreept in een poging een tweede bacterie te vinden., De tweede methode die nodig was om de tweede bacterie, met name een grampositieve bacterie, te isoleren, werd uitgevoerd met behulp van een door een Bunsenbrandervlam gesteriliseerde inoculerende lus om de bouillon uit de oorspronkelijke buis te verspreiden op een mannitolzoutagarplaat die gedurende vier dagen bij 35°C werd geïncubeerd. Na geen groei bleek een geïsoleerde gram-positieve bacteriegroei op een helling in een reageerbuis met het label Alt 8 werd vervolgens ontvangen van de lab instructeur. Daarop werden Tests uitgevoerd., In Tabel 2 worden de uitgevoerde tests, de gebruikte materialen, de incubatietemperatuur en de Geregistreerde resultaten voor de tweede bacterie vermeld. Caseïnetest en een Matlose-test werden uitgevoerd.
de eerste vereiste procedure voor deze groei was een gramkleuring. Kristalviolet, jodium, alcohol en safranine werden gebruikt. De gramreactie van de bacterie werd getest om keuzes te beperken voor wat dit Onbekende kan zijn.
een caseïnetest was de volgende procedure die werd uitgevoerd op de grampositieve bacterie om te bepalen of de bacterie het enzym casease kon produceren., Een inoculerende lus werd gesteriliseerd, bedekt met wat bacteriegroei, en verspreid op een melkagar plaat. Incubatie van deze plaat werd gedaan in een 35°C instelling gedurende vijf dagen.
een maltosetest was de volgende methode die werd gebruikt om de identiteit van de onbekende bacterie te bevestigen. Het zou bepalen of de bacterie zuur kan produceren uit maltosefermentatie. Een vlam gesteriliseerde inoculerende lus met bacteriegroei werd rond het medium geroerd. De buis werd vervolgens gedurende vijf dagen bij 35°C geïncubeerd.,
resultaten
in Tabel 1 zijn de uitgevoerde tests, de gebruikte materialen, de incubatietemperaturen en de resultaten van de gramnegatieve bacterie, Tabel 2 toont deze voor de grampositieve bacterie. In stroomdiagram 1 zijn de tests en hun resultaten voor de gram-negatieve bacterie opgenomen, stroomdiagram 2 toont deze voor de gram-positieve.,d=”5fa084a25a”>Maltose test
DISCUSSIE / CONCLUSIE
De verschillende proeven van de microbiologie klasse handleiding die werden uitgevoerd op zowel de gram-negatieve en gram-positieve bacteriën zijn wat leidde tot hun identiteit., De eerste stap die werd genomen was het isoleren van de bacterie van originele bouillon #105 in twee afzonderlijke kolonies met behulp van de quadrant streak methode op een voedingsagar plaat.
nadat de eerste streep gedurende vijf dagen bij kamertemperatuur had laten incuberen, was er groei op de eerste twee strepen, maar de laatste twee hadden er geen. Deze groei bestond slechts uit één afzonderlijke kolonie, een tweede was niet aanwezig. Dit leidde vervolgens tot de gramkleuring van die kolonie, een tweede streepplaat op voedingsagar in een poging om de benodigde tweede kolonie te kweken, en het gebruik van een mannitol zout agar plaat.,
bij het observeren van de gramkleurige dia van de Eerste kolonie onder de microscoop werden roze coccobacillen gezien. Het zien van deze bijna ronde staafjes bewees dat dit een gramnegatieve bacteriële kolonie was. Omdat alle gram-negatieve opties staven waren, beperkte dit geen van de mogelijkheden.in de wetenschap dat de gramnegatieve bacterie groeide, werd de quadrant streak methode opnieuw gebruikt op een voedingsagar plaat in de hoop dat de grampositieve bacterie ook zou groeien., Ook met behulp van de bouillon van #105 tube, een mannitol zout Agar plaat werd gecoat zijnde dat het selecteert voor gram-positieve bacteriegroei. Bij het controleren van de resultaten na incubatie, was er geen groei op deze plaat, en nog steeds geen tweede duidelijke kolonie. Een geà soleerde gram-positieve bacterie geëtiketteerd Alt 108 werd toen gegeven.
de eerste test op de gramnegatieve kolonie was een citraattest waarbij gebruik werd gemaakt van een splinter van de Citraatagar van green Simmon, geïnoculeerd door groei bovenop de splinter te zetten. Na incubatie was de helling blauw geworden, wat resulteerde in een positieve test., Dit toonde aan dat de bacterie citraat als zijn primaire koolstofbron gebruikt. Dit sloot ook Escherichia coli uit als een mogelijkheid voor mijn gram-negatieve bacterie. De volgende test was de Kliger ijzer test.
De Kligler ijzer test bestond uit het steken van een helling om te testen op vermindering van zwavel, fermentatie van glucose en fermentatie van lactose. Na het uitbroeden was de bovenkant van de helling rood geworden en de onderkant geel. Deze resultaten toonden een negatief resultaat voor waterstofsulfide aangezien er geen zwart in de buis was, wat betekende dat Proteus vulgaris niet langer een optie was., De rode kleur en de gele bodem toonden beide de positieve glucosefermentatie die Pseudomonas aeruginosa uitsloot. Zowel Proteus vulgaris als Pseudomonas aeuginosa werden uitgesloten door het negatieve lactoseresultaat. De volgende methode was een Ureumtest.
Deze test bestond uit het roeren van de bacteriegroei in een tube fenolrood en ureum om de aanwezigheid van zuur te testen. Na incubatie was de bouillon nog steeds een gele kleur, wat een negatief resultaat gaf. Dit bevestigde dat Enterobacter aerogenes de gramnegatieve bacterie was. Ook werd een Methylrode test uitgevoerd om dit antwoord te bevestigen.,
de bacteriegroei werd geroerd in de MR-VP en eiwitbouillon om te bepalen of zuur kon worden geproduceerd als gevolg van glucose-fermentatie. Na incubatie was de bouillon een gele kleur; een negatief resultaat. Dit bevestigde ook dat de onbekende bacterie Enterobacter aerogenes was.
de eerste test op de grampositieve groei was een gramkleuring. Na het doen van de procedure met betrekking tot kristalviolet, jodium, alcohol, en safranine, en het bekijken van de dia onder de microscoop, werden paarse staven gezien., De vorm is staven versmald naar beneden de opties om Bacillus cereus en Bacillus subtilis. De volgende test op deze groei was een caseïnetest.
bacteriegroei werd verspreid op een melkagarplaat om te zien of de bacterie casease produceerde en de caseïne afbreekt. Na incubatie had de plaat witte groei op het, wat een negatief resultaat gaf. Dit negatieve resultaat maakte het mogelijk om de optie vanbacillus cereus uit te sluiten. Dit betekende een bevestiging dat de gram-positieve bacterie Bacillus subtilis was. Om een tweede bevestiging te krijgen werd een maltose test uitgevoerd.,
bacteriegroei werd geroerd in een buis met een rood maltosemedium om te testen op zuur als gevolg van maltosefermentatie. Na incubatie had de vloeistof een gele kleur, wat een positief resultaat gaf voor de zuurproductie. Dit resultaat bevestigde dat de bacterie Bacillus cereus was. Dit was een tegengesteld resultaat dan de caseïnetest had aangetoond.
na een gesprek met de laboratoriumprofessor over de resultaten werd bevestigd dat de caseïnetest echte resultaten had. De onbekende grampositieve bacterie was Bacillus cereus en de grampositieve Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes wordt vaak gezien als de oorzaak van infecties van de onderste luchtwegen, infecties van de huid en weke delen, urineweginfecties (UTIs), endocarditis, intra-abdominale infecties, septische artritis, osteomyelitis, CZS-infecties en oftalmische infecties. (2) Een Probleem met Enterobacter infecties is dat ze vaak niet kunnen worden onderscheiden van andere acute bacteriële infecties.
single-agens antimocribale therapie wordt meestal gebruikt in het geval van Enterobacter infecties., (3) bèta-lactams, aminoglycosiden, Fluroquinolonen, en Trithomprim-sulfamethoxazone (TMP-SMZ) zijn alle antibiotica die regelmatig worden gebruikt om dit soort infecties te behandelen. (2) een probleem met dit is dat wanneer het krijgen van te veel blootstelling aan deze geneesmiddelen resistentie vaak wordt ontwikkeld, die momenteel een groot probleem met deze infecties heeft aangetoond. Vanwege deze weerstanden wordt het combineren van antibiotica met verschillende structuren nu gebruikt als een behandeling voor de infecties, combinatietherapie.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver en Susie Gero. Laboratoriumhandleiding voor algemene Microbiologie., N. p.: n. p., 2011. Afdruk.