antagonisme tussen penicilline en erythromycine tegen Streptococcus pneumoniae in vitro en in vivo

Abstract

De combinatie van β-lactam antibiotica en macroliden wordt vaak aanbevolen voor de eerste empirische behandeling van acute pneumonie om activiteit tegen de belangrijkste pathogenen te verkrijgen. Theoretisch, kan deze combinatie niet effectief zijn, aangezien de bacteriostatische agent het effect van de bactericide agent kan tegenwerken., In deze studie werd de mogelijke interactie tussen penicilline en erytromycine in vitro en in vivo onderzocht tegen vier klinische isolaten van Streptococcus pneumoniae met MICs van penicilline variërend van 0,016 tot 0,5 mg/L en van erytromycine van 0,25 tot >128 mg/L In vitro time–kill curven werden gegenereerd met klinisch relevante concentraties van penicilline (10 mg/L) en erytromycine (1 mg/l), hetzij individueel, hetzij in combinatie. Antagonisme tussen penicilline en erytromycine werd waargenomen voor de vier isolaten., In vivo interactie werd onderzocht in het muizenperitonitis model. Na intraperitoneale inoculatie werden penicilline en erytromycine afzonderlijk of in combinatie gegeven. Voor twee van de vier isolaten was de mortaliteit significant hoger in de groepen behandeld met de combinatie van penicilline en erytromycine dan in de groepen behandeld met penicilline alleen . Met behulp van de muis peritonitis model, in vivo tijd–doden curven toonde aan dat er antagonisme tussen erytromycine en penicilline voor het onderzochte isolaat., Het in vitro en in vivo aangetoond antagonisme tussen penicilline en erytromycine suggereert dat β-lactam antibiotica en macroliden niet samen dienen te worden toegediend tenzij pneumokokkeninfectie wordt uitgesloten.

Inleiding

Het is een uitdaging om de juiste therapie te kiezen voor patiënten met pneumonie, omdat de etiologie niet kan worden voorspeld op basis van de symptomen en klinische bevindingen alleen, en een definitieve microbiologische diagnose meestal niet is vastgesteld voordat de behandeling moet beginnen., Streptococcus pneumoniae is het meest geïsoleerde organisme in gemeenschap-verworven pneumonie, vooral bij kleine kinderen en oudere patiënten, en de infectie draagt nog steeds een hoge mortaliteit.1 echter, infecties met Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae en Legionella spp. komen ook vaak voor2, 3 en deze organismen zijn meestal niet gevoelig voor de antimicrobiële middelen die vaak worden gebruikt voor de behandeling van pneumokokken. Daarom worden penicilline of andere β-lactams vaak aanbevolen in combinatie met erytromycine voor een eerste empirische behandeling van acute pneumonie met onbekende oorzaak.,4

eerder is in vitro en in vivo synergie aangetoond tussen β-lactam antibiotica, zoals penicilline, ampicilline, piperacilline en cefuroxim, wanneer gecombineerd met gentamicine tegen S. pneumoniae.5,6 antagonisme in vitro is aangetoond voor combinaties zoals ampicilline en chlooramfenicol tegen Haemophilus influenzae7 en tegen streptokokken van groep B.,Er is klinisch belangrijk antagonisme gemeld tussen penicilline en tetracycline tegen pneumokokken,9,10 penicilline en erythromycine tegen Groep A streptokokken11 en ampicilline, streptomycine en chlooramfenicol bij acute bacteriële meningitis.Theoretisch kan de empirische initiële behandeling van pneumonie met een combinatie van een β-lactam middel en een macrolide ook niet effectief zijn in het geval van pneumokokkeninfectie, aangezien de bacteriostatische macrolide het bactericide effect van het β-lactam kan tegenwerken.,

in deze studie werd de mogelijke interactie onderzocht tussen penicilline en erytromycine in vitro tegen vier klinische isolaten van pneumokokken met verschillende gevoeligheden voor penicilline en erytromycine.6,13 we bestudeerden interacties in vivo in het muizenperitonitis model.6

materialen en methoden

bacteriën, media en groeicondities voor het peritonitismodel bij muizen

Bacteriesuspensies voor gebruik als inocula voor in vitro en in vivo tests werden bereid uit verse nachtculturen op 5% bloedagarplaten gemaakt van bevroren stamculturen., Het entmateriaal voor de muisexperimenten werd onmiddellijk vóór de inoculatie bereid door de kolonies in steriele Mueller–Hinton bouillon (Statens Serum Institut, Kopenhagen, Denemarken) op te schorten en werd aangepast tot een optische dichtheid bij 540 nm van 0,5–1,0, wat een concentratie van C. 108 cfu/mL oplevert, zoals eerder beschreven.13 voor elk experiment werd de grootte van het entmateriaal bepaald na het maken van 10-voudige verdunningen in Mueller–Hinton bouillon, waarvan 20 µL werd geplateerd op twee 5% bloedagarplaten in duplo vlekken, waarna de kolonies na incubatie ‘ s nachts bij 35°C in de lucht werden geteld., Mucin (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, USA), een enzym-extract van varkensmaag, werd gebruikt als adjuvans voor de inoculatie van de muizen en werd bereid als stamoplossing 10% (g/v) in zoutoplossing.13 vlak voor inoculatie werden de mucineoplossingen 1:1 verdund met pneumokokkensuspensies, wat resulteerde in een uiteindelijke mucineconcentratie van 5% (g/v).

de gebruikte geneesmiddelen waren penicilline G (Leo Pharmaceutical Co., Ballerup, Denemarken) en erythromycine (Sigma Chemical Co.). Penicilline G werd verdund in fosfaatgebufferde zoutoplossing pH 6,5 ± 0.,1, en erytromycine werd verdund in 9 mL steriel water en 1 mL 96% alcohol; de pH van de erytromycine oplossing werd aangepast tot tussen 6,7 en 7,3.

MICs en MBC ‘ s

MICs werden bepaald met de macrodilutiemethode van bouillon in glazen buizen. Alle tests werden in duplo uitgevoerd en de resultaten werden gelezen na 20 uur incubatie bij 35°C. De macrodilutiemethode van de bouillon in glazen buisjes werd uitgevoerd met Mueller–Hinton bouillon (Statens Serum Institut) waaraan 5% schapenbloed werd toegevoegd; er werd een entmateriaal van 106 cfu/mL gebruikt., Penicilline G werd in twee stappen verdund in Mueller– Hinton bouillon tot concentraties van 0,004-64 mg / L. De laagste concentratie antibioticum waarbij er geen zichtbare groei was werd als MIC genomen. We gebruikten S. pneumoniae ATCC 49619 als controle stam voor de MIC tests.

de MBC werd bepaald door subcultuur van buizen zonder zichtbare groei na MIC bepaling. Uit elke buis werd 100 µL gekweekt op agarplaten die penicillinase bevatten (Leo Pharmaceutical Co.) 1000 IE / plaat en kolonies werden geteld na 18-24 uur incubatie bij 35°C., De MBC werd gedefinieerd als de laagste concentratie penicilline die het entmateriaal met ≥99,9% verminderde. Alle testen werden uitgevoerd in duplicaat.

Time-kill curven

om mogelijke interacties tussen penicilline en erytromycine te bestuderen, werden time–kill experimenten uitgevoerd met klinisch relevante penicilline en erytromycine concentraties van respectievelijk 10 en 1 mg / L., Vóór time–kill-experimenten werd isolaat 86 (erytromycine-resistent) gekweekt op 5% agarplaten in het bloed die erytromycine 4 mg/L bevatten (inductie van erytromycine-resistentie) en op platen zonder erytromycine (geen inductie van erytromycine-resistentie). Pneumokokken (106 cfu/mL) werden geïncubeerd in 20 mL Mueller–Hinton bouillon bij 35°C met schudden. Om de exponentiële groei van de bacteriën te verzekeren, werden antibiotica eerst toegevoegd na 1 uur incubatie. Monsters werden genomen vóór de toevoeging van antibiotica en 1, 2, 3 en 5 uur later., Time-kill curven werden niet verder verlengd, aangezien autolyse begon op te treden na 5-6 uur voor alle isolaten. De aantallen cfu/mL werden bepaald na het maken van de juiste verdunningen en 100 µL werd verspreid op 5% bloedagarplaten. Voor onverdunde monsters werden agarplaten met penicillinase (zoals hierboven) gebruikt. Kolonies werden geteld na 20 uur incubatie bij 35°C. Alle time–kill-experimenten werden in duplo uitgevoerd. De variatie in kolonie tellingen op hetzelfde tijdstip voor herhaalde experimenten was <0,5 log10 per mL., Antagonisme werd gedefinieerd als een significant verminderd dodend effect (d.w.z. >0,5 log10 cfu/mL van 1 tot 5 uur na toevoeging van geneesmiddelen) van de combinatie penicilline en erytromycine in vergelijking met alleen penicilline.14

in de time–kill-experimenten hebben we mogelijke pH-veranderingen in de kolven gemeten met pH – teststrips (pH-bereik 4,5-10,0; gegradueerd in 0,5 pH-eenheden; Sigma Chemical Co.).

dierproeven (muisperitonitis model)

alle dierproeven werden goedgekeurd door het Deense nationale dierethische Comité., Vrouwelijke SSC CF-1 muizen (Statens Serum Institut) in de leeftijd van 8-12 weken, gewicht 28-30 g werden gebruikt, in groepen van vijf tot 36 muizen. In totaal gebruikten we 88 muizen voor isolaat 73, 89 muizen voor isolaat 75, 88 muizen voor isolaat 86 (zonder inductie), 94 muizen voor isolaat 86 (geïnduceerd met erythromycine zoals voor time–kill studies) en 89 muizen voor isolaat 93. De muizen werden in kooien gehouden met vijf tot zeven muizen per kooi; ze kregen vrije toegang tot voedsel en water. Pneumokokkensuspensie (0,5 mL) werd intraperitoneaal geïnoculeerd via een 25-gauge spuit., Het entmateriaal bevatte 106 cfu / mL met 5% (m/v) mucine in Mueller–Hinton bouillon. Met behulp van dergelijke inocula, is er c. 100% mortaliteit in onbehandelde muizen, die bezwijken 36-48 h na inoculatie. Antibiotica werden subcutaan toegediend in een volume van 0,25 mL per dosis.Het volgende schema werd gebruikt: erytromycine werd 90 minuten na bacteriële inoculatie gegeven en in de combinatiegroep werd erytromycine 90 minuten na bacteriële inoculatie en penicilline 60 minuten later gegeven. Penicilline werd alleen gegeven 150 min na bacteriële inenting., Controlemuizen kregen 90 minuten na bacteriële inenting een steriele zoutoplossing.

doses penicilline en erytromycine werden gekozen volgens de Hill equation sigmoid dosis–effect curves, op zodanige wijze dat penicilline alleen naar verwachting zou leiden tot ongeveer 95% overleving, terwijl erytromycine alleen naar verwachting mortaliteit zou voorkomen bij 10% van de muizen. Muizen geïnfecteerd met isolaat 73 werden behandeld met penicilline 10 mg/ muis en/of erytromycine 100 µg/muis. Muizen geïnfecteerd met isolaat 75 werden behandeld met penicilline 2 mg/muis en/of erytromycine 100 µg/muis., Muizen geïnfecteerd met isolaat 86 (niet geïnduceerd) werden behandeld met penicilline 150 µg/ muis en/of erytromycine 100 µg/muis. Muizen geïnfecteerd met isolaat 86 (gekweekt in aanwezigheid van subremmende concentraties van erytromycine vóór inoculatie) werden behandeld met penicilline 150 µg/muis en/of erytromycine 100 µg/muis. Muizen geïnfecteerd met isolaat 93 werden behandeld met penicilline 400 µg/muis en/of erytromycine 100 µg/ muis.

bloedmonsters werden verkregen door orbitale snijwonden na verdoving van de muizen met CO2., Muizen werden gedood en peritoneale wasbeurten werden vervolgens uitgevoerd door het injecteren van 2 mL steriele zoutoplossing intraperitoneaal, masseren van de buik en het openen van het buikvlies om de vloeistof te verzamelen.15 bloed en peritoneale vloeistof monsters werden onmiddellijk verdund, en 0,1 mL werd geplateerd op 5% bloed agar platen.

in vivo time-kill curven werden geconstrueerd voor een van de pneumococcus isolaten (nummer 93), die in vivo significant antagonisme vertoonden. Pneumokokken in het buikvlies en bloed werden verkregen na intraperitoneale inoculatie van 36 muizen met 5,0 × 106 cfu/mL van de bacteriesuspensie., Tien minuten, 80 minuten, 140 minuten, 3 uur en 5 uur na de test werden groepen van drie controlemuizen (geïnoculeerd met steriele zoutoplossing) gedood. Bij 140 minuten, 3 uur en 5 uur na challenge werden groepen van drie muizen die 90 minuten na challenge behandeld werden met erytromycine gedood. 3 uur en 5 uur na challenge, groepen van drie muizen behandeld hetzij met de combinatie van penicilline en erythromycine of penicilline alleen 150 minuten na intraperitoneale infectie werden gedood. Bloed en peritoneale spoelingen werden bemonsterd voor kwantitatieve kweek van pneumokokken.,

bepaling van ED50 penicilline voor individuele pneumokokken

De ED50, de enkelvoudige dosis die bescherming biedt aan 50% van de muizen, voor elk pneumococcus-isolaat, werd bepaald door groepen van vijf muizen te behandelen met een verdubbeling van de doses antibiotica; overleving van de muizen werd gedurende 7 dagen waargenomen. Een groep van vijf muizen die met 0,9% NaCl werden behandeld, werd in elk experiment opgenomen als controle op de letaliteit van de infectie. Voor elk isolaat werd de ED50 berekend met de methode Reed & Muench16 en met de Hill equation (GraphPad Prism; GraphPad Software, Inc.,, San Diego, CA, USA). We hebben geen experimenten uitgevoerd om de erytromycine ED50s te berekenen omdat dit eerder is gedaan voor stammen met vergelijkbare MICs in ons laboratorium.We kozen voor penicillinedoses waarvan verwacht wordt dat ze resulteren in een geschatte overleving van 95% van de muizen en erytromycine doses waarvan verwacht wordt dat ze resulteren in een geschatte overleving van 10% van de muizen. Bij combinatietherapie werden de antibiotica in afzonderlijke injecties toegediend.

statistieken

Fisher ‘ s exacte test voor categorische gegevens werd gebruikt, met een tweezijdig significantieniveau van 5%.,

resultaten

De MICs van penicilline en erytromycine en de ED50s van penicilline voor de vier pneumokokkenstammen zijn weergegeven in de tabel. Dodelijke infectie werd bereikt met drie van de vier isolaten. De ED50 van penicilline voor isolaat 86 moest echter worden geschat, omdat het bij de ED50-bepalingsexperimenten slechts mogelijk was de mortaliteit voor 90% te bereiken.

de resultaten van de time–kill-experimenten zijn weergegeven in Figuur 1., Bij deze methode vertoonden alle isolaten in vitro antagonisme voor de combinatie van penicilline en erytromycine (figuur 1a–c en e) omdat erytromycine het bactericide effect van penicilline bijna volledig remde. Echter, wanneer erythromycine resistentie werd geïnduceerd door het kweken van het erythromycine resistente isolaat (nummer 86) op bloedagarplaten die erythromycine 4 mg/L bevatten vóór de time–kill studie, werd erythromycine antagonisme geneutraliseerd (figuur 1d).

voor alle isolaten nam het in vitro dodende effect van penicilline en penicilline plus erytromycine met de tijd toe., De afname van cfu in de controlekolven in sommige experimenten was te wijten aan autolyse, een veel voorkomende waarneming bij pneumokokken. In alle experimenten toonde erythromycine alleen een kleiner dodend effect dan penicilline en de combinatie. Er werd geen dodend effect waargenomen tijdens de 5 uur incubatie in de erytromycine-resistente stam, ongeacht of deze geïncubeerd werd met erytromycine of niet. Er werden geen veranderingen in de pH waargenomen in de kolven die één of beide antibiotica bevatten: de pH was 7,5 na 0, 1, 2, 3, 4 en 5 uur incubatie.,

in het peritonitismodel bij muizen vonden we dat de gecombineerde behandeling van penicilline en erytromycine resulteerde in antagonisme bij muizen met isolaten 75 en 93 (figuur 2b en e). Er was significant hogere mortaliteit bij de muizen behandeld met erytromycine 60 min voor penicilline dan bij muizen behandeld met penicilline alleen (isolaat 75: mortaliteit 32/36 en 3/12, respectievelijk, p < 0,05; isolaat 93: mortaliteit 24/36 en 3/12, respectievelijk, P < 0,05) (Figuur 2)., In de overige twee isolaten was de mortaliteit bij muizen die beide antibiotica kregen vergelijkbaar met die bij muizen die alleen penicilline kregen (figuur 2a en d). Alle controlemuizen stierven bij intraperitoneale pneumokokkeninfectie, behalve muizen die geïnfecteerd waren met isolaat 86, waarvoor de mortaliteit 80-90% bedroeg. Zelfs wanneer het bacteriële entmateriaal van isolaat 86 was verhoogd tot 108 cfu / mL, was er geen 100% mortaliteit.

De laagste sterftecijfers werden gevonden in die groepen muizen die behandeld werden met penicilline alleen of erytromycine plus penicilline in combinatie na bacteriële provocatie., De hoogste mortaliteit werd waargenomen bij controle muizen of muizen die 90 minuten na pneumokokkeninfectie met alleen erytromycine werden behandeld (Figuur 2). Voor isolaat 86 vonden we dat de gecombineerde behandeling significant betere bescherming bood tegen pneumokokkeninfectie dan behandeling met penicilline alleen na 150 minuten (32/35 muizen in de eerste groep overleefden vergeleken met 6/12 in de laatste groep; P = 0,009) of erytromycine alleen (respectievelijk 32/35 en 16/36 overleving; P = 0,005) (figuur 2c)., Wanneer vóór inoculatie met isolaat 86 erytromycine resistentie werd geïnduceerd, gaf de gecombineerde behandeling significant een betere bescherming dan erytromycine alleen (31/36 muizen in de eerste groep overleefden vergeleken met 5/36 in de laatste groep; P = 0,005).

de in vivo time–kill curves voor isolaat 93 lieten een 1-2 log toename van de groei van bacteriën in het bloed zien 80 min na challenge, vergeleken met 10 min na challenge bij de controlemuizen (Figuur 3), terwijl het aantal pneumokokken in peritoneale wasbeurten bij 80 min hetzelfde was als dat 10 min na inoculatie., Het aantal pneumokokken dat werd gekweekt uit bloed en buikvliesspoelingen op verschillende tijdstippen in de verschillende behandelingsgroepen was bijna parallel, met 1-2 log hogere cfu/mL in buikvliesspoelingen dan in bloed. Het doden van bacteriën was het meest efficiënt in de met penicilline behandelde groep, met een afname in bacteriegroei van respectievelijk 3 logs en 4 logs in bloed en peritoneale spoelingen. De combinatietherapie vertoonde een vergelijkbaar effect op de bacteriegroei als wanneer erytromycine alleen werd toegediend (antagonisme).,

discussie

de interactie tussen erytromycine en penicilline tegen pneumokokken werd bestudeerd met vier isolaten met verschillende gevoeligheden voor penicilline of erytromycine. De in vitro time-kill curves voor het erythromycine-gevoelige isolaat (figuur 1a, b en e) toonden een duidelijk antagonisme tussen de twee geneesmiddelen, d.w.z. de aanwezigheid van erythromycine remde de bactericide activiteit van penicilline volledig en de resulterende curve was vergelijkbaar met de langzame remmende activiteit van erytromycine alleen., De remming van het effect van penicilline (dat zuur is) kan te wijten zijn aan een verhoging van de pH veroorzaakt door erytromycine (dat alkalisch is). Het antagonistische effect werd ook gezien in het niet-geïnduceerde erythromycine-resistente pneumokokken-isolaat (86), terwijl inductie van de expressie van het erythromycine-resistentiegen het remmende effect van erythromycine en zijn antagonistische activiteit op penicilline voorkwam., Deze resultaten wijzen er duidelijk op dat de remmende activiteit van het macrolide op de groei of celdeling van de bacteriën de belangrijkste reden is voor antagonisme tegen penicilline, dat alleen kan werken op bacteriën die zich in de groeifase bevinden en een celwand produceren.Deze bacteriostatische activiteit van erytromycine en het remmende effect ervan op penicilline waren duidelijk zichtbaar in de in vivo experimenten.,

om de mogelijke interactie tussen de twee geneesmiddelen in vivo te evalueren, kozen we voor het muizenperitonitis–model, dat voorheen nuttig was bij het aantonen van interactie tussen antibiotica,6 en dat het ook mogelijk maakt om de werking van geneesmiddelen op bacteriën te bestuderen door in vivo time-kill-experimenten uit te voeren op organismen in het buikvlies en/of bloed.17 Doses penicilline en erytromycine werden gekozen volgens de Hill equation sigmoid dosis-effect curven, op zodanige wijze dat penicilline alleen naar verwachting zou resulteren in c., 95% overleving, terwijl erytromycine alleen de mortaliteit bij 10% van de muizen zou kunnen voorkomen. Bij deze doses zou een effect van de erytromycine dosis zonder invloed van een volgende penicilline dosis resulteren in een mortaliteit die uitsluitend bepaald wordt door de activiteit van het macrolide. De antagonistische activiteit van de twee geneesmiddelen werd vervolgens bevestigd, door time–kill curven in vivo, te wijten aan dezelfde groei-remmende activiteit van erytromycine zoals aangetoond in vitro., Het belang van inductie van erytromycine resistentie in het erythromycine resistent isolaat (nummer 86) werd ook aangetoond in vivo: inductie met erytromycine verminderde significant de overleving ondanks behandeling met erytromycine in vergelijking met overleving na behandeling met erytromycine van niet-geïnduceerde pneumokokken.

met één erythromycine-gevoelig isolaat (nummer 73) was het niet mogelijk om in vivo antagonisme aan te tonen met de gebruikte methode. Er kunnen verschillende verklaringen voor zijn., De mogelijkheid dat niet alle pneumokokken op dezelfde wijze reageren als de twee gebruikte geneesmiddelen lijkt onwaarschijnlijk, vooral wanneer de activiteit in vitro even aantoonbaar was. Het is waarschijnlijker dat de situatie in vivo voor de verschillende stammen verschillend is, b.v. de virulentie van de pneumokokken hangt af van een aantal moeilijk te standaardiseren factoren, zoals het type en de grootte van de capsule, andere virulentiefactoren in verband met het membraan of toxines, of het groeigedrag in vivo, dat zeer variabel is voor pneumokokken., Het is waarschijnlijk dat we in vivo antagonisme met isolaat 73 hadden kunnen aantonen als we het entmateriaal en de timing van de twee geneesmiddelen ten opzichte van elkaar hadden ‘getitreerd’, maar dit zou een overmatig aantal dieren vereisen., De duidelijke demonstratie van de interactie tussen de twee geneesmiddelen tegen ten minste twee pneumokokkenstammen zowel in vitro als in vivo, die werd aangetoond door de toename van de mortaliteit en door de veranderingen in in vivo time–kill curven, is voldoende bewijs voor een effect en moet clinici waarschuwen tegen het gebruik van deze twee geneesmiddelen samen voor de behandeling van pneumokokkeninfecties.

de klinische significantie van antagonisme tussen een bactericide geneesmiddel zoals penicilline of ampicilline en een bacteriostatische eiwitsyntheseremmer, bijv., tetracycline, erytromycine of chlooramfenicol is in verschillende studies aangetoond.7-12, 18 antagonisme is in vivo bevestigd in een experimenteel onderzoek met penicilline en chlooramfenicol tegen pneumokokkenmeningitis bij honden.Ondanks deze vroege ervaring met dergelijke geneesmiddelencombinaties wordt de combinatie van penicilline en erythromycine zelfs in standaardhandboeken aanbevolen als empirische behandeling bij pneumonie van onbekende etiologie.4 de combinatie van het geneesmiddel is speciaal gekozen om pneumokokken en Legionella spp. te omvatten.,, die worden beschouwd als belangrijke en dodelijke etiologische agentia bij longontsteking. Het is moeilijk te weten of de resultaten van dit onderzoek rechtstreeks van toepassing zijn op de klinische situatie. In de klinische situatie zouden suboptimale doses erytromycine gewoonlijk niet worden gebruikt, maar bij remmende werking van penicilline kan men zich moeten baseren op het bacteriostatische effect van erytromycine, als de pneumococcus erythromycine gevoelig is. Het is niet bekend of het induceerbare effect van erytromycine, aangetoond in deze studie, ook plaatsvindt in de pneumonische focus bij mensen.,

concluderend kan worden gesteld dat deze studie in vitro antagonisme tussen penicilline en erytromycine heeft aangetoond tegen drie erythromycine-gevoelige isolaten van pneumokokken. Dit antagonisme kwam ook voor met twee van de isolaten in vivo in een eenvoudig experimenteel model met muizen. Wanneer erytromycine resistentie niet werd geïnduceerd, werd antagonisme ook in vitro aangetoond voor het erythromycine-resistente pneumokokken isolaat, maar inductie met erytromycine vóór inoculatie wist het antagonistische effect uit.

de deskundige technische bijstand van Anja Borum en Jytte Mark Andersen wordt zeer gewaardeerd., Voorlopige gegevens gepresenteerd in definitieve vorm in dit manuscript werden gepresenteerd op de zevenendertigste Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Toronto, Ontario, Canada, 28 September-1 oktober 1, 1997 (poster a-29).