CPR Louisville a luglio 1, 2014 | 6:06 pm | Stampa
UNKNOWN RELAZIONE di LABORATORIO
Numero Sconosciuto 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Microbiologia generale I
Primavera 2014
INTRODUZIONE
Identificare e comprendere i microrganismi è importante per più motivi che i batteri sono una delle principali cause di malattia per l’uomo e la malattia., Essere in grado di curare più infezioni e malattie può essere fatto da essere ben informati di diversi microrganismi e come funzionano in ambienti diversi. Questo studio di identificazione di batteri sconosciuti è stato fatto utilizzando varie tecniche utilizzate nella classe di laboratorio di microbiologia fino a questo punto.
MATERIALI E METODI
Una provetta di brodo contenente batteri sconosciuti etichettati con il numero 105 è stata ricevuta dal professore di laboratorio di microbiologia. Una varietà di procedure apprese nella classe di laboratorio di microbiologia sono state eseguite sui batteri sconosciuti., Questi test sono stati eseguiti come indicato nel manuale di laboratorio del corso di microbiologia da Mcdonald, Thoele, Salsgiver e Gero (1) se non diversamente specificato.
Il primo metodo richiesto era il metodo quadrant streak. Questo è stato fatto al fine di isolare i due batteri sconosciuti su una piastra di agar nutriente mediante l’uso di un ciclo di inoculazione, bruciatore Bunsen, e il brodo. L’incubazione di questa piastra a temperatura ambiente è stata quindi eseguita al fine di tentare la determinazione di due colonie separate., Crescita da una colonia su questo piatto è stato poi testato per la sua risposta Gram attraverso fasi di colorazione gram utilizzando iodio, viola cristallo, alcool, e safranina al fine di trovare un singolo tipo di batterio. L’osservazione sotto un microscopio ha reavealed la risposta del grammo del batterio dalla colonia. Nella tabella 1 sono elencate le procedure adottate, i materiali utilizzati, la temperatura di incubazione e i risultati registrati per il primo batterio. Inclusi in questi test sono la fermentazione di citrato, glucosio e lattosio, la riduzione dello zolfo attraverso un test di ferro Kligler, il test dell’urea e il test rosso metilico.,
Sono state quindi prese le misure necessarie per eseguire un test di citrato di Simmon sulla prima colonia batterica utilizzando un ciclo di inoculazione sterilizzato dalla fiamma di un bruciatore Bunsen per mettere la crescita sull’inclinazione dell’agar verde. L’incubazione di quel tubo è stata quindi eseguita per cinque giorni in un ambiente a 35°C. La determinazione dell’uso del citrato da parte del batterio come unica fonte di carbonio è stata la ragione di questo test.
Un test di ferro Kligler è stato eseguito utilizzando la crescita dalla prima colonia al fine di restringere le opzioni del possibile batterio determinando le sue capacità di fermentazione per glucosio e lattosio., Il mezzo è stato pugnalato da una fiamma sterilizzata con ago inoculante con crescita batterica su di esso e incubato a 35°C per cinque giorni.
Un test dell’urea è stato il test successivo completato su questa colonia gram-negativa. Questo è stato fatto mescolando alcuni dei batteri nell’indicatore di pH fenolo rosso e urea fiamma media sterilizzato ciclo inoculante. È stato quindi incubato in un ambiente a 35°C per quarantotto ore. Scoprire se il batterio potesse produrre un acido era lo scopo dietro questo test., Un test rosso metilico è stato eseguito anche sui batteri gram-negativi per determinare se il batterio ha prodotto acido dopo la fermentazione del glucosio. Un ciclo di inoculazione sterilizzato a fiamma con crescita batterica su di esso è stato mescolato attorno al tubo del mezzo MR-VP di proteine e glucosio e incubato a 35°C per quarantotto ore. Questi test sono stati eseguiti per confermare il risultato finale del batterio gram-negativo sconosciuto.
Una seconda piastra di agar nutriente è stata striata nel tentativo di trovare un secondo di batteri., Il secondo metodo necessario per isolare il secondo batterio, in particolare un batterio gram-positivo, è stato fatto utilizzando un ciclo di inoculazione sterilizzato da una fiamma del bruciatore Bunsen per diffondere il brodo dal tubo originale su una piastra di agar di sale di mannitolo che è stata incubata a 35°C per quattro giorni. Dopo che nessuna crescita è apparsa, una crescita batterica gram-positiva isolata su un’inclinazione in una provetta etichettata Alt 8 è stata quindi ricevuta dall’istruttore di laboratorio. I test sono stati quindi eseguiti su questo., Nella tabella 2 sono elencati i test eseguiti, i materiali utilizzati, la temperatura di incubazione e i risultati registrati per il secondo batterio. Sono stati eseguiti un test di caseina e un test di Matlose.
La prima procedura richiesta su questa crescita era una macchia di grammo. Sono stati usati viola di cristallo, iodio, alcool e safranina. La risposta al grammo del batterio è stata testata per restringere le scelte per ciò che potrebbe essere sconosciuto.
Un test della caseina era la procedura successiva eseguita sul batterio gram-positivo per determinare se il batterio potesse produrre la casasi enzimatica., Un ciclo di inoculazione è stato sterilizzato a fiamma, coperto con una certa crescita batterica e si è diffuso su una piastra di agar del latte. L’incubazione di questa piastra è stata effettuata in un ambiente a 35°C per cinque giorni.
Un test del maltosio è stato il metodo successivo utilizzato per confermare l’identità del batterio sconosciuto. Determinerebbe se il batterio potrebbe produrre acido dalla fermentazione del maltosio. Un ciclo di inoculazione sterilizzato a fiamma con crescita batterica è stato mescolato attorno al mezzo. Il tubo è stato quindi incubato a 35°C per cinque giorni.,
RISULTATI
Inclusi nella Tabella 1 sono i test eseguiti, i materiali utilizzati, le temperature di incubazione e i risultati del batterio gram-negativo, la tabella 2 mostra questi per il gram-positivo. Inclusi nel diagramma di flusso 1 sono i test e i loro risultati per il batterio gram-negativo, diagramma di flusso 2 mostra questi per il gram-positivo.,d=”5fa084a25a”>Maltosio test
DISCUSSIONE / CONCLUSIONE
I vari test di microbiologia, laboratorio manuale della classe che sono stati eseguiti sia su batteri gram-negativi e gram-positivi batteri sono ciò che ha portato alla loro identità., Il primo passo è stato isolare il batterio dal brodo originale #105 in due colonie separate usando il metodo della striscia di quadrante su una piastra di agar nutriente.
Dopo aver lasciato incubare la prima striscia a temperatura ambiente per cinque giorni, c’è stata una crescita sulle prime due strisce, ma le ultime due non ne avevano. Questa crescita consisteva solo in una colonia distinta, una seconda non era presente. Questo ha poi portato alla colorazione gram di quella colonia, una seconda piastra striscia su agar nutrienti nel tentativo di far crescere la seconda colonia necessaria, e l’uso di un piatto di agar sale mannitolo.,
Osservando il vetrino gram macchiato della prima colonia al microscopio sono stati visti coccobacilli rosa. Vedere queste aste quasi rotonde ha dimostrato che si trattava di una colonia batterica gram-negativa. Essendo che tutte le opzioni gram-negative erano aste, questo non ha ristretto nessuna delle possibilità.
Sapendo che il batterio gram-negativo è cresciuto, il metodo della striscia di quadrante è stato nuovamente utilizzato su una piastra di agar nutriente nella speranza di far crescere anche il batterio gram-positivo., Inoltre facendo uso del brodo dal tubo #105, un piatto dell’agar del sale del mannitolo è stato ricoperto essendo che seleziona per crescita batterica gram-positiva. Quando si controllano i risultati dopo l’incubazione, non c’è stata crescita su questo piatto e ancora nessuna seconda colonia distinta. È stato quindi somministrato un batterio gram-positivo isolato marcato con Alt 108.
Il primo test fatto sulla colonia gram-negativa è stato un test di citrato utilizzando un’inclinazione di agar citrato di Simmon verde inoculato mettendo la crescita sulla parte superiore dell’inclinazione. Dopo l’incubazione l’inclinazione aveva trasformato un colore blu, risultando in un test positivo., Ciò ha dimostrato che il batterio utilizza il citrato come fonte primaria di carbonio. Questo ha anche escluso l’Escherichia coli come possibilità per il mio batterio gram-negativo. Il prossimo test è stato il test di ferro Kligler.
La prova del ferro di Kligler consisteva nel pugnalare un’inclinazione per testare la riduzione dello zolfo, la fermentazione del glucosio e la fermentazione del lattosio. Dopo l’incubazione, la parte superiore dell’inclinazione era diventata di colore rosso e il fondo era giallo. Questi risultati hanno mostrato un risultato negativo per l’idrogeno solforato poiché non c’era nero nel tubo, il che significava che Proteus vulgaris non era più un’opzione., Il colore rosso e il fondo giallo hanno entrambi mostrato la fermentazione positiva del glucosio che ha escluso Pseudomonas aeruginosa. Sia Proteus vulgaris che Pseudomonas aeuginosa sono stati esclusi dal risultato negativo del lattosio. Il metodo successivo utilizzato era un test dell’urea.
Questo test consisteva nel mescolare la crescita batterica in una provetta di rosso fenolo e urea per verificare la presenza di acido. Dopo l’incubazione il brodo era ancora di colore giallo, dando un risultato negativo. Ciò ha confermato che Enterobacter aerogenes era il batterio gram-negativo. È stato anche eseguito un test rosso metilico per confermare questa risposta.,
La crescita batterica è stata agitata nel MR-VP e nel brodo proteico per determinare se l’acido potesse essere prodotto come risultato della fermentazione del glucosio. Dopo l’incubazione, il brodo era di colore giallo; un risultato negativo. Ciò ha anche confermato che il batterio sconosciuto era Enterobacter aerogenes.
Il primo test fatto sulla crescita gram-positiva era una macchia di gram. Dopo aver fatto la procedura che coinvolge cristallo viola, iodio, alcool, e safranina, e la visualizzazione del vetrino al microscopio, aste viola sono stati visti., La forma essendo aste ristretto le opzioni per Bacillus cereus e Bacillus subtilis. Il test successivo eseguito su questa crescita è stato un test della caseina.
La crescita batterica è stata diffusa su una piastra di agar del latte per vedere se il batterio ha prodotto la caseina e scompone la caseina. Dopo l’incubazione, il piatto ha avuto una crescita bianca su di esso, dando un risultato negativo. Questo risultato negativo ha permesso di escludere l’opzione diBacillus cereus. Ciò significava una conferma che il batterio gram-positivo era Bacillus subtilis. Per ottenere una seconda conferma è stato eseguito un test del maltosio.,
La crescita batterica è stata agitata in un tubo contenente un mezzo di maltosio rosso per testare l’acido come risultato della fermentazione del maltosio. Dopo l’incubazione, il liquido era di colore giallo, dando un risultato positivo per la produzione di acido. Questo risultato ha confermato che il batterio è Bacillus cereus. Questo è stato un risultato opposto rispetto al test della caseina.
Dopo aver parlato con il professore di laboratorio dei risultati, il test della caseina è stato confermato come risultati reali. Il batterio gram-positivo sconosciuto è stato confimato come Bacillus cereus e il gram-negativo come Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes è comunemente visto come la causa di infezioni del tratto respiratorio inferiore, infezioni della pelle e dei tessuti molli, infezioni del tratto urinario (UTI), endocardite, infezioni intra-addominali, artrite settica, osteomielite, infezioni del SNC e infezioni oftalmiche. (2) Un problema con le infezioni da enterobacter è che spesso non possono essere differenziate da altre infezioni batteriche acute.
La terapia antimocribale a singolo agente viene tipicamente utilizzata nei casi di infezioni da enterobacter., (3) Beta-lattami, aminoglicosidi, flurochinoloni e Trithomprim-sulfametossazone (TMP-SMZ) sono tutti antibiotici usati regolarmente per trattare questi tipi di infezioni. (2) Un problema con questo è che quando si ottiene troppa esposizione a questi farmaci resistenza è spesso sviluppato, che ha attualmente dimostrato un grande problema con queste infezioni. A causa di queste resistenze, combinando antibiotici con diverse strutture è ora utilizzato come trattamento per le infezioni, terapia di combinazione.Il sito utilizza cookie tecnici e di terze parti per migliorare la tua esperienza di navigazione. Manuale di laboratorio di Microbiologia Generale., N. p.: n. p., 2011. Stampa.