Antagonismo tra penicillina, eritromicina contro lo Streptococcus pneumoniae in vitro e in vivo

Abstract

La combinazione di β-lattamici e macrolidi è spesso raccomandata per il trattamento empirico iniziale di polmonite acuta per ottenere attività con i più importanti agenti patogeni. Teoricamente, questa combinazione può essere inopportuna, poiché l’agente batteriostatico può antagonizzare l’effetto dell’agente battericida., In questo studio, la possibile interazione tra penicillina e l’eritromicina è stato studiato in vitro e in vivo contro quattro isolati clinici di Streptococcus pneumoniae con Microfoni di penicillina che vanno da 0.016 a 0,5 mg/L e di eritromicina da 0,25 >128 mg/L. In vitro tempo–kill sono state generate le curve con concentrazioni clinicamente rilevanti di penicillina (10 mg/L) e l’eritromicina (1 mg/L), singolarmente o in combinazione. Per i quattro isolati è stato osservato antagonismo tra penicillina ed eritromicina., L’interazione in vivo è stata studiata nel modello di peritonite murina. Dopo inoculazione intraperitoneale, penicillina ed eritromicina sono state somministrate singolarmente o in combinazione. Per due dei quattro isolati, la mortalità era significativamente più alta nei gruppi trattati con la combinazione di penicillina ed eritromicina rispetto ai gruppi trattati con la sola penicillina . Usando il modello di peritonite del topo, le curve di uccisione del tempo in vivo hanno mostrato che c’era antagonismo tra eritromicina e penicillina per l’isolato esaminato., L’antagonismo dimostrato in vitro e in vivo tra penicillina ed eritromicina suggerisce che gli antibiotici β-lattamici e i macrolidi non devono essere somministrati insieme a meno che non sia esclusa l’infezione da pneumococco.

Introduzione

È una sfida scegliere la terapia giusta per i pazienti con polmonite, poiché l’eziologia non può essere prevista in base ai soli sintomi e ai risultati clinici e una diagnosi microbiologica finale di solito non è stata stabilita prima dell’inizio del trattamento., Streptococcus pneumoniae è l’organismo più frequentemente isolato nella polmonite acquisita in comunità, specialmente nei bambini piccoli e nei pazienti più anziani, e l’infezione porta ancora un’alta mortalità.1 Tuttavia, infezioni da Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae e Legionella spp. sono anche comuni2, 3 e questi organismi di solito non sono sensibili agli agenti antimicrobici comunemente usati per il trattamento degli pneumococchi. Pertanto la penicillina o altri β-lattamici sono spesso raccomandati in combinazione con eritromicina per il trattamento empirico iniziale della polmonite acuta di eziologia sconosciuta.,4

In precedenza, in vitro e in vivo sinergia tra antibiotici β-lattamici, come penicillina, ampicillina, piperacillina e cefuroxima, è stato dimostrato quando combinato con gentamicina contro S. pneumoniae.5,6 Antagonismo in vitro è stato dimostrato per combinazioni come ampicillina e cloramfenicolo contro Haemophilus influenza7 e contro streptococchi del gruppo B.,8 Antagonismo clinicamente importante è stato riportato tra penicillina e tetraciclina contro pneumococchi, 9, 10 penicillina ed eritromicina contro streptococci11 del gruppo A e ampicillina, streptomicina e cloramfenicolo nella meningite batterica acuta.12 Teoricamente, il trattamento iniziale empirico della polmonite con una combinazione di un agente β-lattamico e un macrolide può anche essere inopportuno nel caso di infezione da pneumococco, poiché il macrolide batteriostatico può antagonizzare l’effetto battericida del β-lattamico.,

Nel presente studio abbiamo studiato la possibile interazione tra penicillina ed eritromicina in vitro contro quattro isolati clinici di pneumococchi con varie suscettibilità alla penicillina e all’eritromicina.6,13 Abbiamo studiato le interazioni in vivo nel modello di peritonite murina.6

Materiali e metodi

Batteri, mezzi e condizioni di crescita per il modello di peritonite murina

Le sospensioni batteriche da utilizzare come inocula per i test in vitro e in vivo sono state preparate da colture notturne fresche su piastre di agar ematico al 5% a base di colture stock congelate., L’inoculo per gli esperimenti sui topi è stato preparato immediatamente prima dell’inoculazione sospendendo le colonie in brodo sterile di Mueller–Hinton (Statens Serum Institut, Copenhagen, Danimarca) ed è stato regolato a una densità ottica a 540 nm di 0,5–1,0, dando una concentrazione di c. 108 cfu/mL, come descritto in precedenza.13 Per ogni esperimento la dimensione dell’inoculo è stata determinata dopo aver effettuato diluizioni di 10 volte nel brodo di Mueller-Hinton, di cui 20 µL sono stati placcati su due piastre di agar del sangue 5% in punti in duplice copia, con successivo conteggio delle colonie dopo incubazione durante la notte a 35°C in aria., Mucina (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, USA), un estratto enzimatico di stomaco suino, è stato usato come adiuvante per l’inoculazione dei topi ed è stato preparato come soluzione madre 10% (p/v) in soluzione salina.13 Immediatamente prima dell’inoculazione, le soluzioni di mucina sono state diluite 1:1 con sospensioni pneumococciche, dando una concentrazione finale di mucina del 5% (p/v).

I farmaci utilizzati erano penicillina G (Leo Pharmaceutical Co., Ballerup, Danimarca) e eritromicina (Sigma Chemical Co.). La penicillina G è stata diluita in soluzione salina tamponata con fosfato pH 6,5 ± 0.,1, e l’eritromicina è stata diluita in 9 ml di acqua sterile e 1 mL di alcool al 96%; il pH della soluzione di eritromicina è stato regolato tra 6,7 e 7,3.

MICROFONI e MBC

microfoni sono stati determinati con il metodo della macrodiluizione del brodo in tubi di vetro. Tutti i test sono stati eseguiti in duplice copia e i risultati sono stati letti dopo 20 ore di incubazione a 35°C. Il metodo di macrodiluizione del brodo in provette di vetro è stato eseguito con Mueller–Hinton broth (Statens Serum Institut) a cui è stato aggiunto il 5% di sangue di pecora; è stato utilizzato un inoculo di 106 cfu/mL., La penicillina G è stata diluita in due passaggi nel brodo di Mueller– Hinton per dare concentrazioni di 0,004-64 mg/L. La concentrazione più bassa di antibiotico a cui non vi era alcuna crescita visibile è stata presa come MIC. Abbiamo usato S. pneumoniae ATCC 49619 come ceppo di controllo per i test MIC.

L’MBC è stato determinato dalla sottocultura di tubi senza crescita visibile dopo la determinazione del MIC. Da ogni provetta, 100 µL sono stati coltivati su piastre di agar contenenti penicillinasi (Leo Pharmaceutical Co.) 1000 UI/piastra e colonie sono state contate dopo 18-24 ore di incubazione a 35°C., L’MBC è stato definito come la più bassa concentrazione di penicillina che ha ridotto l’inoculo di ≥99,9%. Tutti i test sono stati eseguiti in duplice copia.

Curve time–kill

Per studiare le possibili interazioni tra penicillina ed eritromicina, sono stati eseguiti esperimenti time–kill con concentrazioni clinicamente rilevanti di penicillina ed eritromicina di 10 e 1 mg / L, rispettivamente., Prima degli esperimenti time-kill, isolare 86 (eritromicina resistente) è stato coltivato su piastre di agar del sangue al 5% contenenti eritromicina 4 mg/L (induzione della resistenza all’eritromicina) e su piastre senza eritromicina (nessuna induzione della resistenza all’eritromicina). Pneumococchi (106 cfu / mL) sono stati incubati in 20 ml di brodo di Mueller–Hinton a 35°C con agitazione. Per garantire la crescita esponenziale dei batteri, gli antibiotici sono stati aggiunti per la prima volta dopo 1 ora di incubazione. I campioni sono stati prelevati prima dell’aggiunta di antibiotici e 1, 2, 3 e 5 h più tardi., Le curve Time-kill non sono state ulteriormente estese, poiché l’autolisi ha iniziato a verificarsi dopo 5-6 h per tutti gli isolati. Il numero di cfu / mL è stato determinato dopo aver effettuato diluizioni appropriate e 100 µL sono stati distribuiti su piastre di agar ematico al 5%. Per i campioni non diluiti, sono state utilizzate piastre di agar contenenti penicillinasi (come sopra). Le colonie sono state contate dopo 20 ore di incubazione a 35°C. Tutti gli esperimenti di uccisione del tempo sono stati eseguiti in duplice copia. La variazione dei conteggi delle colonie negli stessi punti temporali per esperimenti ripetuti era < 0,5 log10 per mL., L’antagonismo è stato definito come un effetto di uccisione significativamente diminuito (cioè > 0,5 log10 cfu / mL da 1 a 5 h dopo l’aggiunta di farmaci) della combinazione di penicillina ed eritromicina rispetto alla sola penicillina.14

Negli esperimenti time–kill, abbiamo misurato possibili variazioni di pH nei flaconi con strisce reattive di pH (intervallo di pH 4.5–10.0; graduato in unità di pH 0.5; Sigma Chemical Co.).

Esperimenti su animali (modello di peritonite murina)

Tutti gli esperimenti su animali sono stati approvati dal comitato etico animale nazionale danese., Outbred femmina ssc CF-1 topi (Statens Serum Institut) di età compresa tra 8-12 settimane, peso 28-30 g sono stati utilizzati, in gruppi da cinque a 36 topi. Nel complesso, abbiamo usato 88 topi per isolare 73, 89 topi per isolare 75, 88 topi per isolare 86 (senza induzione), 94 topi per isolare 86 (indotto con eritromicina come per gli studi di uccisione del tempo) e 89 topi per isolare 93. I topi erano tenuti in gabbie con da cinque a sette topi per gabbia; era loro permesso il libero accesso al cibo e all’acqua. La sospensione pneumococcica (0,5 mL) è stata inoculata per via intraperitoneale tramite una siringa calibro 25., L’inoculo conteneva 106 cfu / mL con il 5% (p/v) di mucina nel brodo di Mueller–Hinton. Usando tale inocula, c’è c.100% di mortalità nei topi non trattati, che soccombono 36-48 h dopo l’inoculazione. Gli antibiotici sono stati somministrati per via sottocutanea nella regione del collo in un volume di 0,25 mL per dose.13 È stato utilizzato il seguente schema: l’eritromicina è stata somministrata 90 min dopo l’inoculazione batterica e nel gruppo di combinazione l’eritromicina è stata somministrata 90 min dopo l’inoculazione batterica e la penicillina 60 min dopo. La penicillina è stata somministrata da sola 150 min dopo l’inoculazione batterica., Ai topi di controllo è stata somministrata soluzione salina sterile 90 min dopo l’inoculazione batterica.

Le dosi di penicillina ed eritromicina sono state scelte in base alle curve dose–effetto sigmoide dell’equazione di Hill, in modo tale che la penicillina da sola avrebbe comportato una sopravvivenza di c. 95%, mentre l’eritromicina da sola avrebbe impedito la mortalità nel 10% dei topi. I topi infettati con isolato 73 sono stati trattati con penicillina 10 mg / topo e / o eritromicina 100 µg / topo. I topi infettati con isolato 75 sono stati trattati con penicillina 2 mg / topo e / o eritromicina 100 µg / topo., I topi infettati con isolato 86 (non indotti) sono stati trattati con penicillina 150 µg/ topo e/o eritromicina 100 µg/topo. Topi infettati con isolato 86 (cresciuto in presenza di concentrazioni sub-inibitorie di eritromicina prima dell’inoculazione) sono stati trattati con penicillina 150 µg/topo e/o eritromicina 100 µg/topo. I topi infettati con isolato 93 sono stati trattati con penicillina 400 µg / topo e / o eritromicina 100 µg/ topo.

I campioni di sangue sono stati ottenuti attraverso tagli orbitali dopo aver anestetizzato i topi con CO2., I topi sono stati uccisi e i lavaggi peritoneali sono stati quindi eseguiti iniettando 2 mL di soluzione salina sterile per via intraperitoneale, massaggiando l’addome e aprendo il peritoneo per raccogliere il liquido.15 Campioni di sangue e liquido peritoneale sono stati immediatamente diluiti e 0,1 mL sono stati placcati su piastre di agar di sangue al 5%.

In vivo sono state costruite curve time–kill per uno degli isolati di pneumococco (numero 93), che ha mostrato un antagonismo significativo in vivo. Pneumococchi nel peritoneo e nel sangue sono stati ottenuti dopo l’inoculazione di 36 topi per via intraperitoneale con 5,0 × 106 cfu/mL della sospensione batterica., Dieci minuti, 80 min, 140 min, 3 h e 5 h dopo la sfida, gruppi di tre topi di controllo (inoculati con soluzione salina sterile) sono stati uccisi. A 140 min, 3 h e 5 h dopo la sfida, gruppi di tre topi trattati con eritromicina 90 min dopo la sfida sono stati uccisi. A 3 h e 5 h dopo la sfida, gruppi di tre topi trattati con la combinazione di penicillina ed eritromicina o penicillina da sola 150 min dopo l’infezione intraperitoneale sono stati uccisi. Sangue e lavaggi peritoneali sono stati campionati per la coltura quantitativa di pneumococchi.,

Determinazione di ED50 di penicillina per pneumococchi individuali

L’ED50, la dose singola che dà protezione al 50% dei topi, per ogni isolato di pneumococco è stata determinata trattando gruppi di cinque topi con dosi raddoppiate degli antibiotici; la sopravvivenza dei topi è stata osservata per 7 giorni. Un gruppo di cinque topi trattati con NaCl allo 0,9% è stato incluso in ciascun esperimento come controllo per la letalità dell’infezione. Per ogni isolato l’ED50 è stato calcolato con il metodo Reed & Muench16 e dall’equazione di Hill (GraphPad Prism; GraphPad Software, Inc.,, San Diego, CA, Stati Uniti d’America). Non abbiamo eseguito alcun esperimento per calcolare l’eritromicina ED50s poiché questo è stato fatto in precedenza per ceppi con MICROFONI simili nel nostro laboratorio.17 Abbiamo scelto dosi di penicillina che dovrebbero portare a una sopravvivenza stimata del 95% dei topi e dosi di eritromicina che dovrebbero portare a una sopravvivenza stimata del 10% dei topi. Per la terapia di combinazione, gli antibiotici sono stati somministrati in iniezioni separate.

Statistiche

È stato utilizzato il test esatto di Fisher per i dati categoriali, con un livello di significatività bilaterale del 5%.,

Risultati

I MIC della penicillina e dell’eritromicina e gli ED50 della penicillina per i quattro ceppi pneumococcici sono mostrati nella tabella. L’infezione letale è stata raggiunta con tre dei quattro isolati. Tuttavia, l’ED50 della penicillina per l’isolato 86 doveva essere stimato poiché era possibile raggiungere solo il 90% di mortalità negli esperimenti di determinazione dell’ED50.

I risultati degli esperimenti time–kill sono mostrati in Figura 1., Con questo metodo, tutti gli isolati hanno mostrato antagonismo in vitro per la combinazione di penicillina ed eritromicina (Figura 1a–c ed e) perché l’eritromicina ha quasi completamente inibito l’effetto battericida della penicillina. Tuttavia, quando la resistenza all’eritromicina è stata indotta dalla crescita dell’isolato resistente all’eritromicina (numero 86) su piastre di agar del sangue contenenti eritromicina 4 mg/L prima dello studio time–kill, l’antagonismo all’eritromicina è stato neutralizzato (Figura 1d).

Per tutti gli isolati, l’effetto di uccisione in vitro di penicillina e penicillina più eritromicina è aumentato con il tempo., La diminuzione della cfu osservata nei flaconi di controllo in alcuni esperimenti era dovuta all’autolisi, un’osservazione comune con gli pneumococchi. In tutti gli esperimenti, l’eritromicina da sola ha mostrato un effetto di uccisione minore rispetto alla penicillina e alla combinazione. Non è stato osservato alcun effetto letale durante le 5 ore di incubazione nel ceppo resistente all’eritromicina, incubato o meno con eritromicina. Non sono state osservate variazioni del pH nei flaconi contenenti uno o entrambi gli antibiotici: il pH era 7,5 dopo 0, 1, 2, 3, 4 e 5 ore di incubazione.,

Nel modello di peritonite del topo, abbiamo scoperto che il trattamento combinato di penicillina ed eritromicina ha provocato antagonismo nei topi sfidati con isolati 75 e 93 (Figura 2b ed e). C’era significativamente più alta mortalità nei topi trattati con eritromicina 60 min prima di penicillina che nei topi trattati con penicillina da solo (isolare 75: mortalità 32/36 e 3/12, rispettivamente, P < 0.05; isolare 93: mortalità 24/36 e 3/12, rispettivamente, P < 0.05) (Figura 2)., Nei restanti due isolati, la mortalità nei topi trattati con entrambi gli antibiotici era simile a quella dei topi trattati con la sola penicillina (Figura 2a e d). Tutti i topi di controllo sono morti quando infettati per via intraperitoneale con pneumococchi, ad eccezione dei topi infettati con isolato 86, per i quali la mortalità era dell ‘ 80-90%. Anche quando l’inoculo batterico dell’isolato 86 è stato aumentato a 108 cfu/mL, non c’era il 100% di mortalità.

I tassi di mortalità più bassi sono stati trovati in quei gruppi di topi trattati con penicillina da sola o eritromicina più penicillina in combinazione dopo la sfida batterica., La più alta mortalità è stata osservata tra topi di controllo o topi trattati con eritromicina da sola 90 min dopo l’infezione da pneumococco (Figura 2). Per l’isolato 86 abbiamo scoperto che il trattamento combinato forniva una protezione significativamente migliore contro l’infezione da pneumococco rispetto al trattamento con la sola penicillina dopo 150 min (32/35 topi nel primo gruppo sono sopravvissuti rispetto a 6/12 nel secondo; P = 0,009) o eritromicina da sola (32/35 e 16/36 sopravvivenza, rispettivamente; P = 0,005) (Figura 2c)., Quando la resistenza all’eritromicina è stata indotta prima dell’inoculazione con isolato 86, il trattamento combinato ha fornito una protezione significativamente migliore rispetto all’eritromicina da sola (31/36 topi nel primo gruppo sono sopravvissuti rispetto a 5/36 nel secondo; P = 0,005).

Le curve time–kill in vivo per l’isolato 93 hanno mostrato un aumento di 1-2 log nella crescita di batteri nel sangue 80 min dopo la sfida rispetto a 10 min dopo la sfida nei topi di controllo (Figura 3), mentre il numero di pneumococchi nei lavaggi peritoneali a 80 min era lo stesso di 10 min dopo l’inoculazione., Il numero di pneumococchi coltivati da sangue e lavaggi peritoneali in diversi punti temporali nei diversi gruppi di trattamento era quasi parallelo, con 1-2 log più alti cfu/mL nei lavaggi peritoneali che nel sangue. L’uccisione dei batteri è stata più efficiente nel gruppo trattato con penicillina, con una diminuzione della crescita batterica di 3 registri e 4 registri nei lavaggi del sangue e peritoneale, rispettivamente. La terapia di associazione ha mostrato un effetto simile sulla crescita batterica come quando l’eritromicina è stata somministrata da sola (antagonismo).,

Discussione

L’interazione tra eritromicina e penicillina contro pneumococchi è stata studiata con quattro isolati con diversa suscettibilità alla penicillina o all’eritromicina. Le curve time-kill in vitro per l’isolato sensibile all’eritromicina (Figura 1a, b ed e) hanno mostrato un chiaro antagonismo tra i due farmaci, cioè la presenza di eritromicina ha completamente inibito l’attività battericida della penicillina e la curva risultante era simile alla lenta attività inibitoria della sola eritromicina., L’inibizione dell’effetto della penicillina (che è acida) potrebbe essere dovuta ad aumenti del pH causati dall’eritromicina (che è alcalina). Tuttavia, le misurazioni del pH nei flaconi con la combinazione di farmaci non hanno mostrato cambiamenti nel pH.L’effetto antagonistico è stato visto anche nell’isolato pneumococcico non indotto resistente all’eritromicina (86), mentre l’induzione dell’espressione del gene di resistenza all’eritromicina ha impedito l’effetto inibitorio dell’eritromicina e la sua attività antagonistica sulla penicillina., Questi risultati indicano chiaramente che è l’attività inibitoria del macrolide sulla crescita o sulla divisione cellulare dei batteri che è la ragione principale dell’antagonismo contro la penicillina, che può agire solo sui batteri che si trovano nella fase di crescita e producono una parete cellulare.15 Questa attività batteriostatica dell’eritromicina e il suo effetto inibitorio sulla penicillina erano chiaramente evidenti negli esperimenti in vivo.,

Al fine di valutare la possibile interazione tra i due farmaci in vivo, abbiamo scelto il modello di peritonite murina, che è stato precedentemente utile per dimostrare l’interazione tra antibiotici,6 e che consente anche di studiare l’azione del farmaco sui batteri eseguendo in vivo esperimenti time–kill su organismi nel peritoneo e/o nel sangue.17 Dosi di penicillina ed eritromicina sono stati scelti secondo l’equazione di Hill sigmoid curve dose-effetto, in modo tale che la penicillina da sola sarebbe previsto per provocare c., sopravvivenza del 95%, mentre l’eritromicina da sola sarebbe in grado di prevenire la mortalità solo nel 10% dei topi. Con queste dosi, un effetto della dose di eritromicina senza alcuna influenza di una successiva dose di penicillina si tradurrebbe in una mortalità determinata esclusivamente dall’attività del macrolide. L’attività antagonistica dei due farmaci è stata successivamente confermata, dalle curve di uccisione del tempo in vivo, per essere dovuta alla stessa attività inibitoria della crescita dell’eritromicina dimostrata in vitro., L ‘importanza dell’ induzione della resistenza all ‘eritromicina nell’ isolato resistente all ‘eritromicina (numero 86) è stata dimostrata anche in vivo: l’ induzione con eritromicina ha ridotto significativamente la sopravvivenza nonostante il trattamento con eritromicina rispetto alla sopravvivenza dopo il trattamento con eritromicina di pneumococchi non indotti.

Con un isolato suscettibile all’eritromicina (numero 73), non è stato possibile mostrare antagonismo in vivo con il metodo utilizzato. Ci possono essere diverse spiegazioni per questo., La possibilità che non tutti gli pneumococchi rispondano in modo simile ai due farmaci utilizzati sembra improbabile, soprattutto quando l’attività è stata ugualmente dimostrabile in vitro. È più probabile che la situazione in vivo è diverso per i diversi ceppi, ad esempio, la virulenza del pneumoccci dipende da una serie di fattori che sono difficili da standardizzare, quali il tipo e le dimensioni della capsula, altri fattori di virulenza collegato con la membrana o tossine, o il comportamento di crescita in vivo, che è molto variabile per pneumococchi., È probabile che avremmo potuto dimostrare l’antagonismo in vivo con l’isolato 73 se avessimo “titolato” l’inoculo e la tempistica dei due farmaci in relazione l’uno con l’altro, ma ciò richiederebbe un numero eccessivo di animali., La chiara dimostrazione dell’interazione tra i due farmaci contro almeno due ceppi di pneumococco sia in vitro che in vivo, che è stato dimostrato dall’aumento di mortalità nonché dalle variazioni in vivo–tempo di uccidere curve sono ampie prove per un effetto, e dovrebbero mettere in guardia i medici contro l’uso di questi due farmaci insieme per trattare le infezioni da pneumococco.

Il significato clinico dell’antagonismo tra un farmaco battericida come la penicillina o l’ampicillina e un inibitore batteriostatico della sintesi proteica, ad es., tetraciclina, eritromicina o cloramfenicolo, è stato dimostrato in diversi studi.L’antagonismo 7-12,18 è stato confermato in vivo in uno studio sperimentale con penicillina e cloramfenicolo contro la meningite pneumococcica nei cani.19 Nonostante questa prima esperienza con tali combinazioni di farmaci, la combinazione di penicillina ed eritromicina è raccomandata anche nei libri di testo standard come trattamento empirico nella polmonite di eziologia sconosciuta.4 La combinazione di farmaci è particolarmente scelta per comprendere pneumococchi e Legionella spp.,, che sono considerati agenti eziologici importanti e mortali nella polmonite. È difficile sapere se i risultati del presente studio siano direttamente applicabili alla situazione clinica. Nella situazione clinica, le dosi subottimali di eritromicina non sarebbero solitamente utilizzate, ma con l’azione inibita della penicillina si potrebbe dover fare affidamento sull’effetto batteriostatico dell’eritromicina, se il pneumococco è suscettibile all’eritromicina. Non è noto se l ‘effetto inducibile dell’ eritromicina dimostrato nel presente studio abbia luogo anche nel focus polmonare nell ‘ uomo.,

In conclusione, il presente studio ha dimostrato antagonismo tra penicillina ed eritromicina nei confronti di tre isolati eritromicina-sensibili di pneumococchi in vitro. Questo antagonismo si è verificato anche con due degli isolati in vivo in un semplice modello sperimentale con topi. Quando la resistenza all ‘eritromicina non è stata indotta, l’ antagonismo è stato dimostrato in vitro anche per l ‘isolato pneumococcico resistente all’ eritromicina, ma l ‘induzione con eritromicina prima dell’ inoculazione ha cancellato l ‘ effetto antagonistico.