SZÖVEG
a Clostridium difficile egy spore-képző anaerob nozokomiális kórokozó társul enyhe életveszélyes hasmenés vagy colitis (1, 2). A C. difficile kolonizáció a kórházi tartózkodás hosszával növekszik a spórák környezeti expozíciója vagy a fertőzött személyekkel való érintkezés után (3). A C. difficile spórák kórházi élettelen felületeken történő fertőzéséről és túléléséről számoltak be (4, 5), és kimutatták, hogy összefüggésbe hozható a kereszttranszmisszióval (6, -8).,
a Clostridium difficile spórák inaktiválása és felszámolása kihívást jelent, és számos viszonylag új technikát vizsgáltak, például hidrogén-peroxid gőzt, UV sugárzást vagy gáz halmazállapotú plazmarendszereket (5, 6, 9, 10). Az ilyen technikák érvényesítésének optimális helyreállítási módszereket kell alkalmaznia a bakteriális spórák elpusztításának vagy felszámolásának jobb számszerűsítésére.
számos módszert alkalmaztak a C. difficile kimutatására a kórházi környezetből változó eredményekkel (11, 12). Itt jelentjük a különböző módszerek értékelését a C kimutatására és helyreállítására., difficile spórák anyagok gyakran megtalálható a kórházi környezetben.
(a vizsgálatból származó előzetes adatokat a klinikai mikrobiológia és fertőző betegségek Európai kongresszusán (Barcelona, Spanyolország, 2014.május) poszterként mutatták be.)
egy C. difficile referenciatörzs, az ATCC 700057 (Cruinn Diagnostics, Ireland) és egy nem jellemző klinikai izolátum (Diagnostic Laboratory, Beaumont Hospital, Dublin, Írország) került a vizsgálatba. A Módosítás a C. difficile sport preparation protocol által leírt Chilton et al. használták (13). Röviden, C., nehéz volt beoltott, a prereduced agy, szív, infúzió, kiegészítve élesztő kivonat, l-cisztein, anaerob módon inkubált 37°C-on 48 h, szélesztve 10 Columbia véres agar lemezeken (Oxoid, Egyesült Királyság), amely anaerob módon inkubált 37°C-on 10 nap (14). A növekedést sejtkaparó segítségével gyűjtötték le a lemezekről, majd 1 ml foszfát pufferelt sóoldatban (PBS)-etanolban (50%) szuszpendálták. A szuszpenziókat szobahőmérsékleten 1 órán át inkubáltuk periodikus keveréssel., A spóra szuszpenziókat 10 percig centrifugáltuk 16 000 × g-on, a pelleteket pedig 1 ml PBS-ben reszuszpendáltuk. A spóraszámot és a tisztaságot mikroszkóppal határozták meg a Schaeffer és a Fulton spore stain kit (Sigma-Aldrich, Írország) segítségével. A szuszpenziókat körülbelül 105 CFU / ml koncentrációra állítottuk be (egy kolónia egyenértékű egy spórával), a Soros 1:10 hígítást pedig PBS-ben készítettük.
C., difficile spóra szuszpenziók (50 µl), kezdve 105-10 CFU/ml, adunk két példányban 25 cm2 szakaszok poliuretán matrac szövet (Meditec Medical, Írország), Polipropilén (GoodFellow Cambridge, Ltd., Egyesült Királyság) és rozsdamentes acél, mind a korábban leírtak szerint fertőtlenítve (15). A felületekre felvitt spóraszuszpenziókat 2 órán át levegőn szárítottuk.a felületeket előkezelt műselyem törlőkendővel és nejlon flocked tamponokkal (Copan, Olaszország) mintavételeztük, majd 3 ml PBS-be helyeztük. A tampon szuszpenziók soros hígításait prepoured C. difficile szelektív lemezekre – C., difficile agar base CM0601 plus C. difficile supplement SR0096 (250 mg/liter d-ciklozin, 8 mg / liter cefoxitin) és 7% (vol/vol) defibrinált ló vér (SR0050)—által biztosított Oxoid enumeration CFU/ml. Steril kontaktlemezeket (VWR) öntöttek a laboratóriumba C. difficile szelektív agarral, majd 20 másodpercig minden egyes szakaszra felvitték, biztosítva a felület szilárd érintkezését. Mind a tamponokból, mind a kontaktlemezekből szubkulturált lemezeket egy éjszakán át anaerob módon inkubáltuk 37°C-on., A kimutatási határértéket (lod) az alkalmazott spórák legalacsonyabb koncentrációjaként határozták meg, amelyet egy adott módszerrel detektáltak. Az összes módszert egymástól függetlenül értékelték, és összehasonlították a C. difficile spórák kimutatására és visszanyerésére való képességüket. A statisztikai elemzést GraphPad Prism 5.00 szoftver segítségével végezték. A különböző módszerek hasznosítási arányának három független kísérletének eszközeit a variancia (ANOVA) egyirányú elemzésével, valamint a Tukey többszörös összehasonlító tesztjével elemeztük.,
1983-Ban az első jelentések összehasonlító módszerek a helyreállítási a C. difficile spórák a környezeti üveg felület kimutatta, hogy a törlőkendő, ragasztó tappancsok, valamint a kapcsolatot lemezek, lépjen kapcsolatba lemezek voltak messze a leghatékonyabb módszer, észlelve a spórák alacsony szinten, hogy könnyebb használni viszonylag gyors (16). Azóta különböző módszereket, többek között tamponokat, kontaktlemezeket, kesztyűt és szivacsokat használtak a változó eredményekkel végzett kutatásokhoz és kitörési vizsgálatokhoz. Itt bemutatjuk, hogy az érintkezőlemezek elérték a C legmagasabb visszanyerését., difficile spórák (14-92%) a különböző felületek, beleértve a matrac anyag, polipropilén, rozsdamentes acél, megerősítve és kiterjesztve az eredményeket Buggy et al. (16) az üvegből való visszanyeréshez. A tollas tamponok esetében is hatékony volt a visszanyerés (14-76%), és a legkevésbé hatékony módszer a műselyem-tampon (7-58%) volt (ábra). 1A és andB).B). A helyreállítási százalékos volt egyenesen arányos a méret a kezdeti oltóanyag—azaz, egy oltóanyag 105 CFU/ml szabad érintkezője, hogy visszaszerezze annyira, mint 92%, a mint 14%, 10 CFU/ml oltóanyag., Érintkezője is legérzékenyebb a kimutatására spórák legalább oltóanyag 10 CFU/ml, míg a LOD volt 102 CFU/ml özönlöttek törlőkendő, 103 CFU/ml műselyem törlőkendő, de ez csak akkor igaz, a klinikai különíteni. Statisztikailag, lépjen kapcsolatba lemezek jobbak voltak, mint özönlöttek törlőkendő a polipropilén a klinikai izolátum (P < 0.05) (1. Táblázat), valamint a tartósan jobb műselyem törlőkendő (P < 0.05 P < 0.001) (1. Táblázat), míg nem volt szignifikáns különbség a között, hogy özönlöttek, valamint műselyem törlőkendő., Bár a statisztikai elemzés nem tárt fel jelentős különbséget az összes vizsgált felület visszanyerésében, a matracanyagból származó visszanyerések kissé csökkentek a másik két felülethez képest. Ezenkívül nem volt statisztikai különbség a két izolátum között.
a Referenciatörzs (A) és a klinikai izolátum (B) Clostridium difficile spóráinak százalékos visszanyerése három környezeti felületről érintkező lemezek, tollas tamponok és műselyem tamponok segítségével., A hibasávok az eszközök (SEM) szabványos hibáit képviselik legalább három független kísérletből (n ≥ 3).,”1″> P-érték a statisztikai elemzést egy:
C., a difficile spórákat mind tünetmentes, mind tüneti betegek kiönthetik a környezetbe, és akár 5 hónapig is életben maradhatnak élettelen felületeken (17). Ellenállnak a legtöbb kórházi fertőtlenítőszer baktericid hatásának és a legtöbb egyéb fertőtlenítési technikának (18). Ezért a beavatkozásokat a C. difficile hordozók által jelenleg vagy korábban elfoglalt helyiségekben kell ellenőrizni. A sebesség és érzékenység tekintetében javított módszerek, például az érintkező lemez és az itt bejelentett flocked tamponok jelentése pontosabb becslést ad a C-ről., difficile teher a korábban bejelentett módszerekhez képest. Tekintettel arra, hogy a C. difficile a legjelentősebb endospore a mai egészségügyi környezetben, és jelentős fertőzési kockázatot jelent a veszélyeztetett betegek számára, egyre nagyobb szükség van a C. difficile spórák szennyeződésének pontos számszerűsítésére az egészségügyi környezetben. Ennek célja a fertőtlenítés új módszereinek értékelése, valamint a környezetszennyezés szintjének a fertőzés kockázatával és a kitörések előfordulásával való korrelálása lenne., Mindazonáltal az elfogadott helyreállítási módszerek javítása olyan anyagok felhasználásával, amelyek a kórházi környezetben találhatók, szükséges előfeltétel.