Által CPR-Louisville a július 1-2014 | 6:06 pm | Nyomtatás
ISMERETLEN LABOR
Ismeretlen Szám 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Általános Mikrobiológia I
Tavaszi 2014
BEVEZETŐ
Azonosító, megértő mikroorganizmusok fontos, hogy a többszörös oka az, hogy a baktérium egyik fő oka az emberi betegség, betegség., Több fertőzés és betegség gyógyítására alkalmas lehet, ha jól tájékozódnak a különböző mikroorganizmusokról és arról, hogyan működnek különböző környezetekben. Az ismeretlen baktériumok azonosítására irányuló vizsgálatot a mikrobiológiai laboratóriumi osztályban eddig a pontig alkalmazott különböző technikák alkalmazásával végezték.
anyagok és módszerek
a mikrobiológiai labor professzorától egy, a 105-ös számmal jelölt ismeretlen baktériumokat tartalmazó táptalaj kémcsövét kapták. Az ismeretlen baktériumokon a mikrobiológiai laborban tanult eljárások széles skáláját végezték el., Ezeket a vizsgálatokat a McDonald, Thoele, Salsgiver és Gero (1) mikrobiológiai tanfolyam laboratóriumi kézikönyvében leírtak szerint végezték el, hacsak másként nem jelezzük.
az első szükséges módszer a quadrant streak módszer volt. Erre azért került sor, hogy a két ismeretlen baktériumot egy tápanyag-agárlemezen egy inokuláló hurok, a Bunsen-égő és a húsleves segítségével izolálják. Ezt a lemezt szobahőmérsékleten inkubáltuk, hogy megkíséreljük két különálló kolónia meghatározását., A lemezen lévő kolóniából származó növekedést ezután gram-reakcióval tesztelték a gram-festés lépései révén jód, kristály ibolya, alkohol és szafranin segítségével, hogy egyetlen baktériumtípust találjanak. A mikroszkóp alatt végzett megfigyelés újra lezárta a baktérium gram-válaszát a kolóniából. Az 1. táblázatban az alkalmazott eljárások, a felhasznált anyagok, az inkubáció hőmérséklete, valamint az első baktérium rögzített eredményei szerepelnek. E vizsgálatok közé tartozik a citrát, a glükóz és a laktóz fermentáció, a kén csökkentése Kligler-vas teszten, karbamid-teszten és metil-Vörös teszten keresztül.,
ezután megtették a szükséges lépéseket a Simmon Citrátvizsgálatának elvégzésére az első bakteriális kolónián egy Bunsen-égő lángja által sterilizált inokuláló hurok segítségével, hogy növekedjen a zöld agar ferde. A csövet ezután öt napig inkubáltuk 35°C-on. Ennek a tesztnek az oka annak meghatározása, hogy a baktérium citrátot használ-e egyedüli szénforrásként.
egy Kligler-vaspróbát végeztünk az első kolóniából származó növekedéssel annak érdekében, hogy a lehetséges baktérium lehetőségeit szűkítsük a glükóz és a laktóz fermentációs képességének meghatározásával., A táptalajt egy sterilizált tűvel szúrták meg, rajta baktériumnövekedéssel, majd öt napig 35°C-on inkubálták.
Ezen a gram-negatív kolónián a következő karbamid-teszt volt a következő teszt. Ezt úgy hajtottuk végre, hogy a baktérium egy részét a pH-indikátor fenolvörös és karbamid közepes lángú sterilizált inokulációs hurokba kevergettük. Ezt követően negyvennyolc órán át 35°C-os hőmérsékleten inkubálták. Ennek a tesztnek a célja annak felfedezése, hogy a baktérium képes-e savat előállítani., A gram-negatív baktériumokon Metilvörös tesztet is végeztek annak meghatározására, hogy a baktérium termelt-e savat a glükóz erjesztése után. A baktériumos növekedésű, sterilizált oltási hurkot a fehérje és a glükóz MR-VP közeg csöve körül keverték, majd negyvennyolc órán át 35°C-on inkubálták. Ezeket a vizsgálatokat az ismeretlen gram-negatív baktérium végeredményének megerősítése érdekében végezték el.
egy második tápanyag – agar lemezt csíkoztak a baktériumok egy másodpercének megtalálására., A második módszer szükséges elkülöníteni a második baktérium, pontosabban egy gram-pozitív baktérium, volt segítségével egy beoltani hurok sterilizált egy Bunsen-láng terjedését húsleves az eredeti cső rá egy mannit só agarlemezre ami inkubálják 35°C-négy napig. Miután a növekedés nem jelent meg izolált Gram-pozitív bakteriális növekedés egy ferde egy kémcsőben jelölt Alt 8 ezután kapott a lab oktató. Ezután teszteket végeztek rajta., A 2. táblázatban felsoroljuk az elvégzett vizsgálatokat, a felhasznált anyagokat, az inkubáció hőmérsékletét, valamint a második baktérium rögzített eredményeit. Kazeintesztet és Matlóztesztet végeztek.
a növekedéshez szükséges első eljárás gram-folt volt. Kristály ibolyát, jódot, alkoholt és szafranint használtak. A baktérium gram-válaszát tesztelték, hogy szűkítsék a választási lehetőségeket arra, hogy mi lehet ez az ismeretlen.
egy kazein teszt volt a következő eljárás a gram-pozitív baktériumon annak meghatározására, hogy a baktérium képes-e előállítani az enzim kazeázt., Az oltási hurkot sterilizálták, bakteriális növekedéssel borították, majd egy tej agar lemezre terítették. A lemez inkubálását 35°C-os környezetben öt napig végezték.
a maltóz teszt volt a következő módszer az ismeretlen baktérium azonosításának megerősítésére. Meg fogja határozni, hogy a baktérium képes-e savat előállítani a maltóz erjedéséből. A közeg körül egy bakteriális növekedésű láng sterilizált inokulációs hurkot kevertek. A csövet ezután öt napig 35°C-on inkubáltuk.,
eredmények
az 1. táblázatban szerepelnek az elvégzett vizsgálatok, a felhasznált anyagok, az inkubáció hőmérséklete, valamint a gram-negatív baktérium eredményei, a 2.táblázat ezeket mutatja a gram-pozitívra vonatkozóan. A folyamatábra 1 tartalmazza a gram-negatív baktériumra vonatkozó teszteket és azok eredményeit, a Flowchart 2 ezeket a gram-pozitívra mutatja.,d=”5fa084a25a”>Maltóz teszt
VITA / KÖVETKEZTETÉST
A különböző vizsgálatok a mikrobiológiai labor osztály kézi, hogy végeztek, mind a gram-negatív, mind a gram-pozitív baktériumok, mi vezetett a kilétüket., Az első lépés az volt, hogy a baktériumot az eredeti #105 táptalajból két különálló kolóniába izoláljuk a kvadránscsíkos módszerrel egy tápanyag-agar lemezen.
miután az első csíklemezt öt napig szobahőmérsékleten inkubálták, az első két csíkon növekedés volt, de az utolsó kettőnek nem volt. Ez a növekedés csak egy különálló kolóniából állt, egy második nem volt jelen. Ez a kolónia grammfestéséhez vezetett, egy második csíklemez a tápanyag-agaron, hogy megpróbálja megnövelni a szükséges második kolóniát, valamint egy mannit só Agar lemez használatát.,
a mikroszkóp alatt az első kolónia gram festett csúszkájának megfigyelésekor rózsaszín kokcobacillusokat láttak. Látva ezeket a szinte kerek rudakat, bebizonyosodott, hogy ez egy gram-negatív bakteriális kolónia. Mivel az összes gram-negatív lehetőség rúd volt, ez nem szűkítette le a lehetőségeket.
tudva, hogy a gram-negatív baktérium nőtt, a quadrant streak módszert ismét egy tápanyag-agar lemezen alkalmazták, abban a reményben, hogy a gram-pozitív baktérium is növekszik., A #105 csőből készült húslevest is használva egy mannit só Agar lemezt vontak be, hogy kiválassza a Gram-pozitív bakteriális növekedést. Az inkubáció utáni eredmények ellenőrzésekor nem volt növekedés ezen a lemezen, még mindig nincs második különálló kolónia. Ezután egy Alt 108 nevű izolált gram-pozitív baktériumot adtak.
a gram-negatív kolónián végzett első teszt egy citrátteszt volt, amelyet zöld Simmon citrát agarjának lejtésével oltottak be, a növekedés tetejére helyezve. Az inkubálás után a ferde kék színűvé vált, ami pozitív tesztet eredményezett., Ez azt mutatta, hogy a baktérium a citrátot használja elsődleges szénforrásként. Ez kizárta az Escherichia coli-t is, mint a gram-negatív baktériumom lehetőségét. A következő teszt a Kligler vas teszt volt.
A Kligler-féle vaspróba a kén csökkentésének, a glükóz erjedésének és a laktóz erjedésének vizsgálata céljából egy ferde szúrásból állt. Inkubálás után a ferde teteje piros színű lett, az alsó pedig sárga. Ezek az eredmények negatív eredményt mutattak a hidrogén-szulfid esetében, mivel a csőben nem volt fekete, ami azt jelentette, hogy a Proteus vulgaris már nem volt lehetőség., A piros szín és a sárga alja egyaránt pozitív glükóz erjedést mutatott, ami kizárta a Pseudomonas aeruginosa-t. Mind a Proteus vulgaris, mind a Pseudomonas Aeuginosa kizárta a negatív laktóz eredményt. A következő módszer karbamid teszt volt.
Ez a vizsgálat abból állt, hogy a baktérium növekedését fenolvörös és karbamidos csőbe keverték a sav jelenlétének vizsgálatára. Az inkubálás után a húsleves még mindig sárga színű volt, negatív eredményt adva. Ez megerősítette, hogy az Enterobacter aerogenes volt a gram-negatív baktérium. A válasz megerősítésére metil-Vörös tesztet is végeztek.,
a baktériumnövekedést az MR-VP-be és a fehérjehúsba keverték annak meghatározása érdekében, hogy a glükóz erjedés következtében sav keletkezhet-e. Az inkubáció után a húsleves sárga színű volt; negatív eredmény. Ez azt is megerősítette, hogy az ismeretlen baktérium Enterobacter aerogenes volt.
a gram-pozitív növekedésen végzett első teszt gram-folt volt. A kristálylila, a jód, az alkohol és a szafranin bevonását és a csúszda mikroszkóp alatt történő megtekintését követően lila rudakat láttak., A forma a Bacillus cereus és a Bacillus subtilis formájára szűkült. A növekedés következő tesztje kazein teszt volt.
Baktériumnövekedést terjesztettek egy tej agar lemezre, hogy kiderüljön, a baktérium termelt-e kazeázt és lebontotta-e a kazeint. Az inkubáció után a lemez fehér növekedést mutatott rajta, negatív eredményt adva. Ez a negatív eredmény lehetővé tette a lehetőség kizárásátbacillus cereus. Ez azt jelentette, hogy megerősítést nyert, hogy a gram-pozitív baktérium Bacillus subtilis volt. Annak érdekében, hogy egy második megerősítést kapjunk, maltóz tesztet végeztünk.,
a baktériumok növekedését egy vörös maltóz közeget tartalmazó csőbe keverték, hogy a maltóz erjedés eredményeként savat teszteljenek. Az inkubáció után a folyadék sárga színű volt, pozitív eredményt adva a savtermeléshez. Ez az eredmény megerősítette, hogy a baktérium Bacillus cereus. Ez ellentétes eredmény volt, mint amit a kazein teszt mutatott.
miután beszélt a labor professzorral az eredményekről, a kazein tesztet igaz eredményként igazolták. Az ismeretlen gram-pozitív baktérium Bacillus cereus, a gram-negatív pedig Enterobacter aerogenes volt.,
az Enterobacter aerogenes általában az alsó légúti fertőzések, bőr-és lágyszöveti fertőzések, húgyúti fertőzések (UTI-k), endocarditis, intraabdominalis fertőzések, szeptikus ízületi gyulladás, osteomyelitis, központi idegrendszeri fertőzések és szemészeti fertőzések okozója. (2) az Enterobacter fertőzések egyik problémája az, hogy gyakran nem különböztethetők meg más akut bakteriális fertőzésektől.
egyetlen ágens antimokribális terápiát tipikusan Enterobacter fertőzések esetén alkalmaznak., (3) A béta-laktámok, aminoglikozidok, Flurokinolonok és Tritomprim-szulfametoxazon (tmp-SMZ) az ilyen típusú fertőzések kezelésére rendszeresen alkalmazott antibiotikumok. (2) ezzel kapcsolatban az a kérdés, hogy amikor túl sok expozíciót tapasztalnak ezeknek a gyógyszereknek, gyakran kialakul a rezisztencia, amely jelenleg nagy problémát mutatott ezekkel a fertőzésekkel kapcsolatban. Ezeknek az ellenállásoknak köszönhetően az antibiotikumokat különböző struktúrákkal kombinálják a fertőzések kezelésére, kombinációs terápiára.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver és Susie Gero. Laboratóriumi kézikönyv az Általános Mikrobiológiához., NP.: NP., 2011. Nyomtatás.