par CPR Louisville à Juillet 1, 2014 | 6:06 pm | Imprimer
UNKNOWN LAB REPORT
Unknown Number 105
Michelle sinovcic
bio 203: microbiologie générale i
printemps 2014
introduction
L’identification et la compréhension des micro-organismes sont importantes pour de multiples raisons étant que les bactéries sont une cause majeure de maladies et de maladies humaines., Être capable de guérir plus d’infections et de maladies peut être fait en étant bien informé des différents micro-organismes et de leur fonctionnement dans différents environnements. Cette étude d’identification de bactéries inconnues a été réalisée en utilisant diverses techniques utilisées dans la classe de laboratoire de microbiologie jusqu’à présent.
Matériaux et méthodes
Un tube à essai de bouillon contenant des bactéries inconnues portant le numéro 105 a été reçu du professeur du laboratoire de microbiologie. Une variété de procédures apprises en classe de laboratoire de microbiologie ont été effectuées sur les bactéries inconnues., Ces tests ont été effectués comme indiqué dans le manuel de laboratoire du cours de microbiologie par Mcdonald, Thoele, Salsgiver et Gero (1), sauf indication contraire.
la première méthode requise était la méthode quadrant streak. Cela a été fait afin d’isoler les deux bactéries inconnues sur une plaque de gélose nutritive à l’aide d’une boucle d’inoculation, d’un brûleur Bunsen et du bouillon. L’Incubation de cette plaque à température ambiante a ensuite été effectuée afin de tenter de déterminer deux colonies distinctes., La croissance d’une colonie sur cette plaque a ensuite été testée pour sa réponse en Gram par des étapes de coloration en gram à l’aide d’iode, de violet cristallin, d’alcool et de safranine afin de trouver un seul type de bactérie. L’Observation au microscope a révélé la réponse gram de la bactérie de la colonie. Le tableau 1 énumère les procédures suivies, les matériaux utilisés, la température d’incubation et leurs résultats enregistrés pour la première bactérie. Ces tests comprennent la fermentation du Citrate, du Glucose et du Lactose, la réduction du soufre par un test de fer Kligler, un test D’urée et un test de rouge méthylique.,
Les mesures nécessaires ont ensuite été prises pour effectuer un test de Citrate de Simmon sur la première colonie bactérienne à l’aide d’une boucle d’inoculation stérilisée par la flamme d’un brûleur Bunsen pour mettre la croissance sur l’inclinaison de la gélose verte. L’Incubation de ce tube a ensuite été effectuée pendant cinq jours à 35°C. La détermination de l’utilisation par la bactérie du citrate comme seule source de carbone a été la raison de ce test.
un test de fer de Kligler a été effectué en utilisant la croissance de la première colonie afin de réduire les options de la bactérie possible en déterminant ses capacités de fermentation pour le Glucose et le Lactose., Le milieu a été poignardé par une aiguille d’inoculation stérilisée à la flamme avec une croissance bactérienne dessus et incubé à 35°C pendant cinq jours.
un test à L’urée a été le prochain test effectué sur cette colonie à gram négatif. Cela a été fait en remuant une partie de la bactérie dans l’indicateur de pH phénol rouge et urée boucle d’inoculation stérilisée à la flamme moyenne. Il a ensuite été incubé à 35°C pendant quarante-huit heures. Découvrir si la bactérie peut ou non produire un acide était le but de ce test., Un test de rouge méthylique a également été effectué sur les bactéries à gram négatif pour déterminer si la bactérie produisait ou non de l’acide après la fermentation du glucose. Une boucle d’inoculation stérilisée à la flamme avec une croissance bactérienne a été agitée autour du tube du milieu de protéine et de glucose MR-VP et incubée à 35°C pendant quarante-huit heures. Ces tests ont été effectués afin de confirmer le résultat final de la bactérie gram négative inconnue.
Une seconde plaque de gélose nutritive était striée dans la tentative de trouver une seconde de bactéries., La deuxième méthode nécessaire pour isoler la deuxième bactérie, en particulier une bactérie à gram positif, a été réalisée en utilisant une boucle d’inoculation stérilisée par une flamme de brûleur Bunsen pour répandre le bouillon du tube d’origine sur une plaque de gélose au sel de mannitol qui a été incubée à 35°C pendant quatre jours. Après l’absence de croissance, une croissance bactérienne gram positive isolée sur une pente dans un tube à essai marqué Alt 8 a ensuite été reçue de l’instructeur de laboratoire. Des Tests ont ensuite été effectués à ce sujet., Le tableau 2 énumère les tests effectués, les matériaux utilisés, la température d’incubation et leurs résultats enregistrés pour la deuxième bactérie. Un test de caséine et un test de Matlose ont été effectués.
la première procédure requise sur cette croissance était une tache de gram. La violette cristalline, l’iode, l’alcool et la safranine ont été utilisés. La réponse gram de la bactérie a été testée pour affiner les choix pour ce que cette inconnue peut être.
un test de caséine était la procédure suivante effectuée sur la bactérie gram-positive pour déterminer si la bactérie pouvait produire l’enzyme casease., Une boucle d’inoculation a été stérilisée à la flamme, recouverte d’une certaine croissance bactérienne et étalée sur une plaque de gélose au lait. L’Incubation de cette plaque s’est faite à 35°C pendant cinq jours.
un test de maltose a été la prochaine méthode utilisée afin de confirmer l’identité de la bactérie inconnue. Elle déterminerait si la bactérie peut produire de l’acide à partir de la fermentation du maltose. Une boucle d’inoculation stérilisée à la flamme avec croissance bactérienne a été agitée autour du milieu. Le tube a ensuite été incubé à 35°C pendant cinq jours.,
résultats
Le tableau 1 comprend les tests effectués, les matériaux utilisés, les températures d’incubation et les résultats de la bactérie à gram négatif, le tableau 2 Les montre pour le Gram positif. Inclus dans L’organigramme 1 sont les tests et leurs résultats pour la bactérie à gram négatif, L’organigramme 2 Les montre pour le Gram positif.,d= »5fa084a25a »>test de Maltose
discussion / conclusion
les différents tests du manuel de classe du laboratoire de microbiologie qui ont été effectués sur les bactéries gram-négatives et gram-positives sont ce qui a conduit à leur identité., La première étape a consisté à isoler la bactérie du bouillon original #105 en deux colonies distinctes à l’aide de la méthode des traînées de quadrant sur une plaque de gélose nutritive.
Après avoir laissé la première plaque de stries incuber à température ambiante pendant cinq jours, il y a eu une croissance sur les deux premières stries, mais les deux dernières n’en ont pas eu. Cette croissance ne se composait que d’une colonie distincte, une seconde n’était pas présente. Cela a ensuite conduit à la coloration en gram de cette colonie, à une deuxième plaque de strie sur une gélose nutritive pour tenter de cultiver la deuxième colonie nécessaire et à l’utilisation d’une plaque de gélose au sel de Mannitol.,
en observant la lame tachée de gram de la première colonie au microscope, on a vu des coccobacilles roses. Voir ces tiges presque rondes a prouvé qu’il s’agissait d’une colonie bactérienne à gram négatif. Étant donné que toutes les options gram-négatives étaient des tiges, cela n’a réduit aucune des possibilités.
sachant que la bactérie gram-négative s’est développée, la méthode de la strie du quadrant a été utilisée à nouveau sur une plaque de gélose nutritive dans l’espoir de faire croître la bactérie gram-positive également., En utilisant également le bouillon du tube #105, une plaque de gélose au sel de Mannitol a été enduite étant qu’elle sélectionne pour la croissance bactérienne à gram positif. Lors de la vérification des résultats après l’incubation, il n’y avait pas de croissance sur cette plaque, et toujours pas de deuxième colonie distincte. Une bactérie gram positive isolée marquée Alt 108 a ensuite été administrée.
le premier test effectué sur la colonie à gram négatif a été un test au citrate utilisant une pente de gélose au Citrate de Simmon Vert inoculée en plaçant la croissance sur le dessus de la pente. Après l’incubation, l’inclinaison avait pris une couleur bleue, ce qui avait donné un test positif., Cela a montré que la bactérie utilise le citrate comme source de carbone primaire. Cela a également exclu Escherichia coli comme une possibilité pour ma bactérie à gram négatif. Le test suivant était le test de fer de Kligler.
le test de fer de Kligler consistait à poignarder une pente afin de tester la réduction du soufre, la fermentation du glucose et la fermentation du lactose. Après incubation, le haut de la pente avait pris une couleur rouge et le fond était jaune. Ces résultats ont montré un résultat négatif pour le sulfure d’hydrogène car il n’y avait pas de noir dans le tube, ce qui signifiait que Proteus vulgaris n’était plus une option., La couleur rouge et le fond jaune ont tous deux montré la fermentation positive du glucose qui a exclu Pseudomonas aeruginosa. Proteus vulgaris et Pseudomonas aeuginosa ont été écartés par le résultat négatif en lactose. La méthode suivante utilisée était un test D’urée.
Ce test consistait à remuer la croissance bactérienne dans un tube de rouge phénol et d’urée pour tester la présence d’acide. Après l’incubation, le bouillon était encore de couleur jaune, donnant un résultat négatif. Cela a confirmé que Enterobacter aerogenes était la bactérie à gram négatif. Un test de rouge méthylique a également été effectué pour confirmer cette réponse.,
la croissance bactérienne a été agitée dans le MR-VP et le bouillon de protéines afin de déterminer si de l’acide pouvait être produit à la suite de la fermentation du glucose. Après incubation, le bouillon était de couleur jaune; un résultat négatif. Cela a également confirmé que la bactérie inconnue était Enterobacter aerogenes.
le premier test effectué sur la croissance à gram positif était une tache de gram. Après avoir effectué la procédure impliquant du violet cristallin, de l’iode, de l’alcool et de la safranine, et visionné la lame au microscope, des tiges violettes ont été vues., La forme étant des tiges rétrécies vers le bas les options à Bacillus cereus et Bacillus subtilis. Le test suivant effectué sur cette croissance était un test à la caséine.
la croissance bactérienne a été étalée sur une plaque de gélose au lait afin de voir si la bactérie produisait du casease et décomposait la caséine. Après incubation, la plaque avait une croissance blanche, donnant un résultat négatif. Ce résultat négatif a permis d’exclure l’option debacillus cereus. Cela signifiait une confirmation que la bactérie à gram positif était Bacillus subtilis. Afin d’obtenir une deuxième confirmation, un test de maltose a été effectué.,
la croissance bactérienne a été agitée dans un tube contenant un milieu de maltose rouge pour tester l’acide à la suite de la fermentation du maltose. Après incubation, le liquide était de couleur jaune, donnant un résultat positif pour la production d’acide. Ce résultat a confirmé que la bactérie était Bacillus cereus. C’était un résultat opposé à celui que le test de la caséine avait montré.
Après avoir parlé avec le professeur de laboratoire des résultats, le test de caséine a été confirmé comme ayant de vrais résultats. La bactérie gram-positive inconnue a été confimée comme étant Bacillus cereus, et la bactérie gram-négative étant Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes est généralement considérée comme la cause d’infections des voies respiratoires inférieures, d’infections de la peau et des tissus mous, d’infections des voies urinaires (uti), d’endocardite, d’infections intra-abdominales, d’arthrite septique, d’ostéomyélite, d’infections du SNC et d’infections ophtalmiques. (2) un problème avec les infections à entérobactéries est qu’elles ne peuvent souvent pas être différenciées des autres infections bactériennes aiguës.
un traitement antimocribal à agent unique est généralement utilisé dans les cas d’infections à entérobactéries., (3) Les bêta-lactamines, les Aminoglycosides, les Fluroquinolones et la Trithomprim-sulfaméthoxazone (TMP-SMZ) sont tous des antibiotiques utilisés régulièrement pour traiter ces types d’infections. (2) un problème avec cela est que lorsque vous êtes trop exposé à ces médicaments, la résistance est souvent développée, ce qui a actuellement montré un problème important avec ces infections. En raison de ces résistances, la combinaison d’antibiotiques avec différentes structures est maintenant utilisée comme traitement pour les infections, la thérapie combinée.
Mcdonald, Victoria, Marie Thoele, le projet de Loi Salsgiver, et Susie Gero. Manuel de laboratoire pour la microbiologie générale., N. P.: N. P., 2011. Imprimer.