Un fragment variable à chaîne unique (scFv) est une protéine de fusion des régions variables des chaînes lourdes (VH) et légères (VL) des immunoglobulines, reliée à un peptide de liaison court de dix à environ 25 acides aminés. L’éditeur de liens est généralement riche en glycine pour la flexibilité, ainsi qu’en sérine ou en thréonine pour la solubilité, et peut connecter L’extrémité N du VH à L’extrémité C du VL, ou vice versa., Cette protéine conserve la spécificité de l’immunoglobuline d’origine, malgré l’élimination des régions constantes et l’introduction de l’agent de liaison.
Ces molécules ont été créées pour faciliter l’affichage du phage , où il est très pratique d’exprimer le domaine de liaison à l’antigène en tant que peptide unique. Comme alternative, scFv peut être créé directement à partir de chaînes lourdes et légères sous-clonées dérivées d’un hybridome. Les scFv ont de nombreuses utilisations, par exemple la cytométrie en flux, l’immunohistochimie et en tant que domaines de liaison à l’antigène des récepteurs artificiels des cellules T.,
Contrairement aux anticorps monoclonaux, qui sont souvent produits dans des cultures de cellules de mammifères, les scFv sont plus souvent produits dans des cultures de cellules de bactéries telles que E. coli
le fragment de liaison à l’antigène (fragment Fab) est une région sur un anticorps qui se lie aux antigènes. Il est composé d’un domaine constant et d’un domaine variable de chacune des chaînes lourde et légère. Ces domaines forment le paratope-le site de liaison à l’antigène-à l’extrémité amino terminale du monomère. Les deux domaines variables lient l’épitope sur leurs antigènes spécifiques.,
dans un cadre expérimental, des fragments Fc et Fab peuvent être générés en laboratoire. L’enzyme papaïne peut être utilisée pour cliver un monomère d’immunoglobuline en deux fragments Fab et un fragment Fc. L’enzyme pepsine se clive sous la région de charnière, de sorte qu’un fragment F(ab’)2 et un fragment pFc’ sont formés. Le fragment F(ab’)2 peut être divisé en deux fragments Fab’ par réduction légère.,
les régions variables des chaînes lourdes et légères peuvent être fusionnées pour former un fragment variable à chaîne unique (scFv), qui n’est que la moitié de la taille du fragment Fab, tout en conservant la spécificité originale de l’immunoglobuline mère.
Une diabody est constituée de deux scFv avec des peptides liés à l’éditeur de liens qui sont trop courts pour que les deux régions variables se replient ensemble (environ cinq acides aminés), forçant les scFv à se dimériser. Il a été démontré que les Diabodies ont des constantes de dissociation jusqu’à 40 fois plus faibles que les scFv correspondants, ce qui signifie qu’elles ont une affinité beaucoup plus élevée avec leur cible.,
Deux scFv (qui se lient à des antigènes identiques ou différents) peuvent également être connectés à des lieurs plus longs tels que des fermetures éclair à leucine.