Frontiers in Pharmacology

Introducción

sin embargo, varios estudios en animales han demostrado que el CBD produce curvas dosis-respuesta en forma de U invertidas. Estas curvas se describieron por primera vez en ratas probadas en el modelo de ansiedad elevated plus maze (EPM) (Guimarães et al., 1990). En ese estudio, el CBD aumentó la exploración de brazo abierto (un efecto similar al ansiolítico) a dosis de 2.5-10 mg/kg, pero no a 20 mg/Kg (Guimarães et al., 1990)., Se han descrito curvas de dosis-respuesta similares en forma de campana en otros estudios que investigan los efectos del CBD en el comportamiento. Por ejemplo, el pez cebra tratado con 0.5 mg/kg de CBD pasó significativamente más tiempo en la zona superior del acuario (lo que se interpreta como un efecto ansiolítico), mientras que el comportamiento de los peces tratados con las dosis más bajas (0.1 mg/kg) y más altas (5 y 10 mg/kg) no difirió de los controles (Nazario et al., 2015). Un patrón similar también se observó en ratas espontáneamente hipertensas (SHRs), que presentan un fenotipo conductual tipo esquizofrenia., La inhibición del prepulso en esta cepa de ratas se invirtió en 30 mg/kg de CBD, pero no en las dosis de 15 y 60 mg/kg (Levin et al., 2014). Lo mismo se observó utilizando el modelo de deterioro cognitivo inducido por reserpina en ratas, un modelo animal de enfermedad de Parkinson y discinesia tardía. Mientras que el CBD, a la dosis de 0,5 mg/kg, atenuó el déficit de memoria inducido por reserpina en la tarea discriminativa, la dosis de 5 mg/kg resultó ineficaz (Peres et al., 2016).,

existe una clara necesidad de explorar nuevas formas de manejar los trastornos de ansiedad, ya que su tratamiento sigue siendo problemático y generalmente involucra una combinación de medicamentos, incluyendo benzodiazepinas y antidepresivos. Estos medicamentos tienen sus desventajas, como el riesgo de dependencia y síndrome de abstinencia, efectos secundarios sexuales, deterioro cognitivo y psicomotor, inicio retardado de la acción (antidepresivos), baja aceptación y requisito de un control cuidadoso de la dosis (Katzman et al., 2014; Bandelow et al., 2015; Sgnaolin et al., 2016)., El CBD no parece inducir efectos adversos significativos en los seres humanos (Bergamaschi et al., 2011b). Sin embargo, desde una posible perspectiva terapéutica, es esencial determinar si un patrón de dosis-respuesta similar en forma de U invertida también está presente en humanos. Para investigar esta posibilidad, elegimos uno de los efectos más consistentes del CBD, la disminución aguda de la ansiedad. Este efecto se ha descrito en varios modelos animales y en voluntarios sanos y pacientes con trastorno de ansiedad social (SAD) (Guimarães et al., 1990; Zuardi et al., 1993; Bergamaschi et al., 2011a; Crippa et al.,, 2011); sin embargo, no se ha investigado el uso de dosis múltiples en humanos.

un método ampliamente utilizado para inducir ansiedad experimental en humanos es la tarea de hablar en público simulado (SPST – Graeff et al., 2003). El SPST es muy consistente en elevar la ansiedad auto-calificada. Sin embargo, sus efectos sobre las respuestas fisiológicas (frecuencia cardíaca, presión arterial y secreción de cortisol) son menos consistentes (Palma et al., 1994; Hetem et al., 1996; de-Paris et al., 2003)., Un metaanálisis de 11 estudios que utilizaron el SPST confirmó esta observación, mostrando un aumento significativo en el tamaño del efecto general sobre la ansiedad subjetiva, pero no sobre la presión arterial sistólica (PAS) y la frecuencia cardíaca (Zuardi et al., 2013). La escasa evidencia en la literatura sugiere que hablar en público en una situación de la vida real es más eficiente para aumentar las respuestas fisiológicas (Turner et al., 1990; Dickerson y Kemeny, 2004). En un estudio reciente, comparamos la prueba de hablar en público en una situación real (TPSRS) y el SPST., Los resultados mostraron que ambos métodos fueron efectivos en el aumento de la ansiedad subjetiva, pero solo el TPSRS aumentó la frecuencia cardíaca, la PAS y la presión arterial diastólica (pad) (Zuardi et al., 2013).

el presente estudio, por lo tanto, fue diseñado para probar la hipótesis de que el aumento de dosis de CBD produciría efectos ansiolíticos en un patrón de dosis-respuesta en forma de U invertida en voluntarios sanos sometidos al TPSRS.,

materiales y métodos

sujetos

sesenta hombres y mujeres sanos de 18-35 años, sin antecedentes de enfermedad psiquiátrica pasada o actual, alcohol u otra dependencia de drogas fueron reclutados a través de publicidad en el campus de la Universidad de São Paulo en Ribeirão Preto. No se incluyeron participantes con condiciones médicas importantes o que estaban tomando medicamentos con el potencial de interferir con los resultados del estudio., Los voluntarios fueron entrevistados para evaluar la elegibilidad y medir su propensión a la ansiedad a través de la versión de rasgo del inventario de ansiedad estado-rasgo de Spielberger (STAI – Spielberger et al., 1970). Los participantes elegibles que aceptaron participar fueron instruidos a abstenerse de drogas en la semana previa a las pruebas y de alcohol y cafeína en las 24 h previas a la prueba., Todos los voluntarios dieron su consentimiento informado por escrito para participar después de haber sido plenamente informados de los procedimientos de investigación, que se ajustaron a los términos actuales de la Declaración de Helsinki y fueron aprobados por el Comité de Ética del Hospital Universitario de la Facultad de Medicina de Ribeirão Preto (HCRP-No.12407/09).

Los voluntarios fueron asignados aleatoriamente a cinco grupos con 12 sujetos cada uno para recibir diferentes dosis de CBD (100, 300 y 900 mg), clonazepam (1 mg) o placebo en un diseño aleatorizado doble ciego., Los grupos fueron emparejados de acuerdo con el sexo, la edad, el índice de masa corporal (IMC) y la puntuación stai-trait. Un voluntario del grupo CBD-300 no pudo asistir a la sesión experimental debido a problemas personales y fue retirado del estudio.

drogas

El polvo de Cannabidiol con una pureza del 99,6% (sin otros cannabinoides presentes) disuelto en aceite de maíz en dosis de 100 y 200 mg/ml fue proporcionado amablemente por Biosynthesis Pharma Group (BSPG-Pharm, Sandwich, Reino Unido). La solución de CBD, las tabletas de clonazepam (Rivotril®, Roche Lab) y el placebo (aceite de maíz) se envasaron en cápsulas de gelatina idénticas., Todos los voluntarios recibieron cinco cápsulas de un mililitro cada una, en las siguientes combinaciones: cinco cápsulas que contienen aceite de maíz (grupo placebo); una cápsula de CBD 100 mg/ml y cuatro cápsulas de aceite de maíz (grupo CBD-100); tres cápsulas de CBD 100 mg/ml y dos cápsulas de aceite de maíz (grupo CBD-300); cuatro cápsulas de CBD 200 mg/ml y una cápsula de CBD 100 mg/ml (grupo CBD-900); y una cápsula con clonazepam y cuatro cápsulas de aceite de maíz (clonazepam grupo – clon)., Cada tratamiento recibió un número aleatorio y tanto el investigador encargado de dispensar las cápsulas como el voluntario desconocían su contenido (doble ciego). Finalmente, la elección del intervalo entre la administración del fármaco y el TPSRS se basó en estudios farmacológicos previos que mostraban que las concentraciones plasmáticas máximas de CBD y CLON tomadas por vía oral generalmente se producen entre las 2 y 3 h después de la ingestión (Agurell et al., 1981; Crevoisier et al., 2003; Borgwardt et al., 2008; Fusar-Poli et al., 2009; Martin-Santos et al., 2012)., El CBD experimenta un efecto significativo de primer paso que conduce a la formación de una serie de metabolitos y su semivida en humanos se encontró entre 2 y 5 días después de la administración oral. La biodisponibilidad del CBD oral en humanos es de alrededor del 6%, lo que respalda la opinión de que tiene un efecto sustancial de primer paso (Zhornitsky y Potvin, 2012). El nivel plasmático medio de CBD a las 1, 2 y 3 h después de la administración aguda de 600 mg fue de 0,36, 1,62 y 3,4 ng/ml, respectivamente (Martin-Santos et al., 2012)., La elección de las dosis utilizadas en este estudio se basó en evidencia previa que mostraba que la administración oral aguda de 300 mg de CBD tenía efectos ansiolíticos en el SPST (Zuardi et al., 1993).

mediciones psicológicas

Se utilizaron dos factores de la escala visual analógica del Estado de ánimo (VAMS), traducida y validada al portugués por Zuardi y Karniol (1981), para evaluar los niveles de ansiedad y los efectos sedantes durante la prueba. El VAMS es un instrumento autoadministrado que consta de 16 ítems. Antes del TPSRS, cada voluntario se sometió a una sesión de capacitación para completar la escala., Se pidió a los sujetos que marcaran el punto que identificaba su estado subjetivo Actual en una línea recta de 100 mm colocada entre dos palabras que describen estados de ánimo opuestos (por ejemplo, tiempo relajado). Un análisis factorial de la versión portuguesa de la escala identificó cuatro factores (Zuardi et al.,, 1993): (1) ‘ansiedad’, que comprende los elementos calmado–excitado, relajado–tenso y tranquilo–preocupado; (2) ‘sedación’, que incluye los elementos alerta–somnoliento y atento–soñador; (3) ‘deterioro cognitivo’, que incluye ingenioso-mentalmente lento, competente–incompetente, energético–letárgico, lúcido–muzzy, gregario-retraído, bien coordinado–torpe y fuerte–débil; y (4) ‘malestar’, que incluye los elementos interesado-aburrido, feliz–triste, contento–descontento, y amistoso–antagonista (parente et al., 2005). Desde estudios previos con ambos ansiogénicos (Crippa et al., 2004; Parente et al.,, 2005)y medicamentos ansiolíticos como el CBD (Crippa et al., 2004, 2011; Bergamaschi et al., 2011a) han demostrado que solo los factores de ansiedad y sedación presentan cambios durante las tareas de oratoria, utilizamos solo los ítems de estos factores del VAMS para reducir el tiempo de administración y permitir la ejecución del protocolo. Este procedimiento se utilizó previamente en el estudio de validación del PSRST (Zuardi et al., 2013).

las mediciones fisiológicas

la presión arterial sistólica, la PAD y la frecuencia cardíaca (FC) se midieron con un esfigmomanómetro digital (Omron, Brasil).,

prueba de hablar en público en una situación Real (TPSRS)

en este procedimiento, cada sujeto debe hablar frente a un grupo y, en la misma sesión experimental, participar en la audiencia cuando los otros miembros del grupo estén hablando. Se instruye al público a permanecer en silencio y con una expresión neutral durante los discursos.

se realizaron cinco sesiones experimentales con 12 sujetos cada una (excepto 1, que incluyó 11 sujetos). Al comienzo de la sesión, se informó a los voluntarios del número de tratamientos que recibirían (como se detalló anteriormente)., Los voluntarios fueron entonces instruidos para tomar asientos marcados con sus respectivos números de tratamiento. Los asientos estaban numerados de tal manera que, al final de las cinco sesiones, los sujetos de cada grupo de tratamiento habían ocupado todas las posiciones posibles. La secuencia de procedimientos siempre siguió el mismo orden desde la primera hasta la duodécima silla en un esfuerzo por minimizar un posible efecto de orden en la secuencia de oradores., Por ejemplo, los temas del grupo CDB-300 ocuparon las siguientes posiciones: primera sesión – 3, 8; Segunda Sesión – 4, 9; Tercera Sesión – 5, 10; cuarta sesión – 1, 6, 11; quinta sesión – 2, 7, 12.

procedimiento

Los voluntarios comenzaron la sesión experimental después de un mínimo de 6 h de sueño y 2 h después de comer un desayuno estándar (200 ml de leche con chocolate y 100 g de pan con margarina).,

los 12 voluntarios se sentaron en sillas dispuestas en semicírculo, siguiendo un orden predeterminado por el número de tratamiento asignado a cada uno de ellos y realizaron las mediciones basales, seguido de la ingesta de las cinco cápsulas dentro de un intervalo de 5 minutos para cada voluntario. Esta fase se completó durante un período de 1 h. los voluntarios luego vieron una película sobre aves de la selva amazónica que duró unos 20 min. Después de eso, las mediciones se repitieron con un intervalo de 5 min para cada sujeto (medida pretest)., 2 h y 20 min después de que el primer voluntario hubiera recibido el tratamiento, todos vieron un video de aproximadamente 10 min con instrucciones grabadas para la prueba del habla. 2 h y 30 min después de que el primer voluntario recibió el tratamiento, comenzaron a realizar la prueba del habla, que duró 5 min. Posteriormente, los otros voluntarios fueron sometidos a la prueba del habla en el mismo orden en que habían recibido los tratamientos., La prueba de discurso consistió en preparar silenciosamente un discurso de 1 minuto sobre un tema relacionado con «las condiciones de un servicio público de su ciudad», elegido por casualidad entre 12 opciones y revelado inmediatamente antes de la preparación del discurso. El discurso preparado se presentó durante 2 min, con los otros participantes y los investigadores sirviendo como audiencia. El discurso se interrumpió a mitad de camino para las mediciones., La secuencia de los procedimientos en esta fase fue la siguiente: (a) sentarse en una silla dispuesta frente a otras personas; (b) elegir el tema del discurso; (c) pensar en el tema durante 1 minuto; (d) comenzar el discurso, que se interrumpió después de 1 minuto; (e) completar la escala de autoevaluación (factores de ansiedad y sedación VAMS) y las mediciones fisiológicas; (f) continuar el discurso durante otro minuto. Esta secuencia duró 5 min como máximo, de modo que, después de 1 h, todos los voluntarios habían pasado por el procedimiento. La fase final del estudio comenzó 216 min después de que el primer voluntario hubiera tomado el medicamento., Todas las mediciones se repitieron, manteniendo el intervalo de 5 minutos para cada voluntario. La tabla 1 presenta un esquema del procedimiento experimental.