por CPR Louisville a 1 de julio de 2014 | 6:06 pm | imprimir
informe de laboratorio desconocido
número desconocido 105
Michelle sinovcic
bio 203: General Microbiology i
Spring 2014
introducción
identificar y comprender los microorganismos es importante por múltiples razones, ya que las bacterias causa principal de enfermedades y enfermedades humanas., Ser capaz de curar más infecciones y enfermedades se puede hacer al estar bien informado de los diferentes microorganismos y cómo funcionan en diferentes entornos. Este estudio de identificación de bacterias desconocidas se realizó utilizando diversas técnicas utilizadas en la clase de laboratorio de Microbiología hasta este momento.
Materiales y métodos
se recibió un tubo de ensayo de caldo con bacterias desconocidas etiquetadas con el número 105 del profesor del laboratorio de Microbiología. Una variedad de procedimientos aprendidos en la clase de laboratorio de microbiología se realizaron en las bacterias desconocidas., Estas pruebas se realizaron según lo indicado en el manual del laboratorio del curso de Microbiología por Mcdonald, Thoele, Salsgiver y Gero (1) a menos que se indique lo contrario.
el primer método requerido fue el método de racha cuadrante. Esto se hizo con el fin de aislar las dos bacterias desconocidas en una placa de agar nutriente mediante el uso de un bucle de inoculación, un quemador Bunsen y el caldo. La incubación de esta placa a temperatura ambiente se llevó a cabo con el fin de intentar la determinación de dos colonias separadas., El crecimiento de una colonia en esta placa se probó para su respuesta Gram a través de pasos de tinción de gram utilizando yodo, violeta de cristal, alcohol y safranina con el fin de encontrar un solo tipo de bacteria. La observación bajo un microscopio reveló la respuesta gram de la bacteria de la colonia. En la tabla 1 se enumeran los procedimientos realizados, los materiales utilizados, la temperatura de incubación y los resultados registrados para la primera bacteria. Se incluyen en estas pruebas la fermentación de citrato, glucosa y lactosa, la reducción de azufre a través de una prueba de hierro de Kligler, la prueba de Urea y la prueba de rojo de metilo.,
se tomaron las medidas necesarias para realizar una prueba de citrato de Simmon en la primera colonia bacteriana utilizando un asa inoculadora esterilizada por la llama de un quemador Bunsen para poner crecimiento en la inclinación del agar Verde. La incubación de ese tubo se realizó durante cinco días en un ajuste de 35 ° C. La determinación del uso del citrato de la bacteria como su única fuente de carbono fue la razón detrás de esta prueba.
se realizó una prueba de hierro de Kligler utilizando el crecimiento de la primera colonia con el fin de reducir las opciones de la posible bacteria mediante la determinación de sus capacidades de fermentación de glucosa y lactosa., El medio fue apuñalado por una aguja de inoculación esterilizada por llama con crecimiento bacteriano en él e incubado a 35°C durante cinco días.
una prueba de Urea fue la siguiente prueba completada en esta colonia gram-negativa. Esto se hizo agitando parte de la bacteria en el indicador de pH rojo fenol y la llama de medio de urea esterilizada bucle de inoculación. Luego se incubó a 35 ° C durante cuarenta y ocho horas. Descubrir si la bacteria podría producir un ácido fue el propósito detrás de esta prueba., También se realizó una prueba de rojo metilo en las bacterias gramnegativas para determinar si la bacteria producía ácido después de fermentar glucosa. Se agitó un asa de inoculación esterilizada por llama con crecimiento bacteriano alrededor del tubo del medio MR-VP de proteína y glucosa y se incubó a 35°C durante cuarenta y ocho horas. Estas pruebas se realizaron con el fin de confirmar el resultado final de la bacteria gramnegativa desconocida.
una segunda placa de agar nutriente fue rayada en el intento de encontrar un segundo de bacterias., El segundo método necesario para aislar la segunda bacteria, específicamente una bacteria grampositiva, se realizó mediante el uso de un bucle de inoculación esterilizado por una llama de quemador Bunsen para esparcir el caldo desde el tubo original sobre una placa de agar de sal de manitol que se incubó a 35°C durante cuatro días. Después de que ningún crecimiento apareciera un crecimiento bacteriano gram-positivo aislado en una inclinación en un tubo de ensayo etiquetado Alt 8 Fue entonces recibido del instructor de laboratorio. Luego se realizaron pruebas en eso., En la Tabla 2 se enumeran las pruebas realizadas, los materiales utilizados, la temperatura de incubación y los resultados registrados para la segunda bacteria. Se realizó una prueba de caseína y una prueba de Matlose.
el primer procedimiento requerido en este crecimiento fue una tinción de gram. Se utilizó violeta cristal, yodo, alcohol y safranina. La respuesta gram de la bacteria se probó para reducir las opciones de lo que este desconocido puede ser.
una prueba de caseína fue el siguiente procedimiento realizado en la bacteria grampositiva para determinar si la bacteria podía producir la caseasa enzimática., Un bucle de inoculación fue esterilizado con llama, cubierto con un poco de crecimiento bacteriano, y se extendió sobre una placa de agar de leche. La incubación de esta placa se realizó a 35°C durante cinco días.
una prueba de maltosa fue el siguiente método utilizado para confirmar la identidad de la bacteria desconocida. Determinaría si la bacteria podría producir ácido a partir de la fermentación de maltosa. Se agitó alrededor del medio un asa de inoculación esterilizada por llama con crecimiento bacteriano. El tubo se incubó a 35 ° C durante cinco días.,
resultados
en la tabla 1 se incluyen las pruebas realizadas, los materiales utilizados, las temperaturas de incubación y los resultados de la bacteria gram-negativa, la Tabla 2 los muestra para el gram-positivo. En el diagrama de flujo 1 se incluyen las pruebas y sus resultados para la bacteria gram-negativa, el diagrama de flujo 2 los muestra para la bacteria gram-positiva.,d=»5fa084a25a»>prueba de maltosa
discusión / conclusión
las diversas pruebas del manual de la clase del laboratorio de microbiología que se realizaron en las bacterias gram-negativas y gram-positivas son las que llevaron a su identidad., El primer paso tomado fue aislar la bacteria del caldo original #105 en dos colonias separadas usando el método de rayas cuadrantes en una placa de agar nutriente.
después de dejar que la placa de la primera raya se incubara a temperatura ambiente durante cinco días, hubo crecimiento en las dos primeras rayas, pero las dos últimas no tuvieron ninguna. Este crecimiento solo consistía en una colonia distinta, una segunda no estaba presente. Esto llevó a la tinción de gram de esa colonia, una segunda placa de rayas en agar nutriente en un intento de hacer crecer la segunda colonia necesaria, y el uso de una placa de Agar de sal de manitol.,
al observar el portaobjetos Gram teñido de la primera colonia bajo el microscopio se observaron cocobacilos rosados. Ver estas varillas casi redondas demostró que se trataba de una colonia bacteriana gramnegativa. Siendo que todas las opciones gramnegativas eran barras, esto no redujo ninguna de las posibilidades.
sabiendo que la bacteria gram-negativa creció, el método de la raya del cuadrante fue utilizado otra vez en una placa nutritiva del agar con la esperanza de crecer la bacteria gram-positiva también., También usando el caldo del tubo #105, se cubrió una placa de Agar de sal de manitol que selecciona para el crecimiento bacteriano grampositivo. Al comprobar los resultados después de la incubación, no había crecimiento en esta placa, y todavía no había una segunda colonia distinta. Luego se administró una bacteria gram-positiva aislada etiquetada como Alt 108.
la primera prueba realizada en la colonia gramnegativa fue una prueba de citrato usando una inclinación de agar Citrato de Green Simmon inoculado poniendo crecimiento en la parte superior de la inclinación. Después de la incubación, la inclinación se había vuelto de color azul, lo que resultó en una prueba positiva., Esto demostró que la bacteria utiliza citrato como su fuente primaria de carbono. Esto también descartó Escherichia coli como una posibilidad para mi bacteria gramnegativa. La siguiente prueba fue la prueba de hierro de Kligler.
la prueba de hierro de Kligler consistió en apuñalar una inclinación para probar la reducción de azufre, la fermentación de glucosa y la fermentación de lactosa. Después de incubar, la parte superior de la inclinación se había vuelto de color rojo y la parte inferior era amarilla. Estos resultados mostraron un resultado negativo para el sulfuro de hidrógeno ya que no había negro en el tubo, lo que significaba que Proteus vulgaris ya no era una opción., El color rojo y el fondo amarillo mostraron la fermentación positiva de glucosa que descartó Pseudomonas aeruginosa. Tanto Proteus vulgaris como Pseudomonas Aeuginosa fueron descartados por el resultado negativo de lactosa. El siguiente método utilizado fue una prueba de Urea.
esta prueba consistió en remover el crecimiento bacteriano en un tubo de rojo fenol y urea para probar la presencia de ácido. Después de la incubación, el caldo seguía siendo de color amarillo, dando un resultado negativo. Esto confirmó que Enterobacter aerogenes era la bacteria gramnegativa. También se realizó una prueba de rojo metilo para confirmar esta respuesta.,
el crecimiento bacteriano se agitó en el MR-VP y el caldo de proteínas para determinar si se podía producir ácido como resultado de la fermentación de glucosa. Después de la incubación, el caldo era de color amarillo; un resultado negativo. Esto también confirmó que la bacteria desconocida era Enterobacter aerogenes.
la primera prueba realizada en el crecimiento gram-positivo fue una tinción de gram. Después de hacer el procedimiento con violeta de cristal, yodo, alcohol y safranina, y ver el portaobjetos bajo el microscopio, se observaron varillas púrpuras., La forma de ser varillas redujo las opciones a Bacillus cereus y Bacillus subtilis. La siguiente prueba realizada en este crecimiento fue una prueba de caseína.
el crecimiento bacteriano se extendió sobre una placa de agar de leche con el fin de ver si la bacteria produjo casease y descomponer la caseína. Después de la incubación, la placa tenía un crecimiento blanco en ella, dando un resultado negativo. Este resultado negativo hizo posible descartar la opción de Bacillus cereus. Esto significaba una confirmación de que la bacteria grampositiva era Bacillus subtilis. Para obtener una segunda confirmación se realizó una prueba de maltosa.,
el crecimiento bacteriano se agitó en un tubo que contenía un medio de maltosa roja para probar el ácido como resultado de la fermentación de maltosa. Después de la incubación, el líquido era de color amarillo, dando un resultado positivo para la producción de ácido. Este resultado confirmó que la bacteria era Bacillus cereus. Este fue un resultado opuesto al que había mostrado la prueba de caseína.
después de hablar con el profesor de laboratorio sobre los resultados, se confirmó que la prueba de caseína tenía resultados verdaderos. La bacteria grampositiva desconocida se confimó como Bacillus cereus, y la bacteria grampositiva como Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes se considera comúnmente como la causa de infecciones del tracto respiratorio inferior, infecciones de la piel y tejidos blandos, infecciones del tracto urinario (u), endocarditis, infecciones intraabdominales, artritis séptica, osteomielitis, infecciones del SNC e infecciones oftálmicas. (2) un problema con las infecciones por Enterobacter es que a menudo no se pueden diferenciar de otras infecciones bacterianas agudas.
la terapia antimocribal de un solo agente se usa típicamente en los casos de infecciones por Enterobacter., (3) los betalactámicos, aminoglucósidos, Fluroquinolonas y Trithomprim-sulfametoxazona (tmp-SMZ) son todos antibióticos utilizados regularmente para tratar este tipo de infecciones. (2) un problema con esto es que cuando se expone demasiado a estos medicamentos, a menudo se desarrolla resistencia, lo que actualmente ha mostrado un gran problema con estas infecciones. Debido a estas resistencias, la combinación de antibióticos con diferentes estructuras se utiliza ahora como un tratamiento para las infecciones, terapia de combinación.Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver y Susie Gero. Lab Manual for General Microbiology (en inglés)., N. P.: N. P., 2011. Imprimir.