Un fragmento variable de cadena única (scFv) es una proteína de fusión de las regiones variables de las cadenas pesadas (VH) y ligeras (VL) de las inmunoglobulinas, conectada con un péptido de enlace corto de diez a aproximadamente 25 aminoácidos. El enlazador es generalmente rico en glicina para la flexibilidad, así como serina o treonina para la solubilidad, y puede conectar el N-terminal de la VH con el C-terminal de la VL, o viceversa., Esta proteína conserva la especificidad de la inmunoglobulina original, a pesar de la eliminación de las regiones constantes y la introducción del enlazador.
estas moléculas fueron creadas para facilitar la exhibición del fago, donde es altamente conveniente expresar el dominio antígeno-obligatorio como solo péptido. Como alternativa, el scFv se puede crear directamente a partir de cadenas pesadas y ligeras subclonadas derivadas de un hibridoma. Los ScFvs tienen muchos usos, por ejemplo, citometría de flujo, inmunohistoquímica y dominios de unión a antígenos de receptores de células T artificiales.,
a diferencia de los anticuerpos monoclonales, que a menudo se producen en cultivos celulares de mamíferos, los scFvs se producen más a menudo en cultivos celulares de bacterias como E. coli
La Unión al antígeno del fragmento (fragmento Fab) es una región en un anticuerpo que se une a los antígenos. Se compone de una constante y un dominio variable de cada una de las cadenas pesada y ligera. Estos dominios dan forma al paratopo – el sitio de unión al antígeno-en el extremo terminal amino del monómero. Los dos dominios variables se unen al epítopo en sus antígenos específicos.,
en un entorno experimental, se pueden generar fragmentos Fc y Fab en el laboratorio. La enzima papaína se puede utilizar para dividir un monómero de inmunoglobulina en dos fragmentos Fab y un fragmento Fc. La enzima pepsina se divide por debajo de la región de la bisagra, por lo que se forma un fragmento F(ab’)2 y un fragmento pFc’. El fragmento F (ab’) 2 se puede dividir en dos fragmentos Fab’ mediante una leve reducción.,
las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras pueden fusionarse para formar un fragmento variable de cadena única (scFv), que es solo la mitad del tamaño del fragmento Fab, pero conserva la especificidad original de la inmunoglobulina original.
una diabodia es dos scFvs con péptidos enlazadores conectados que son demasiado cortos para que las dos regiones variables se plieguen (aproximadamente cinco aminoácidos), forzando a los scFvs a dimerizarse. Se ha demostrado que las diabodias tienen constantes de disociación hasta 40 veces más bajas que los scFv correspondientes, lo que significa que tienen una afinidad mucho mayor con su objetivo.,
dos scFv (que se unen a los mismos o diferentes antígenos) también pueden estar conectados con enlazadores Más largos, como cremalleras de leucina.