TEKST
Clostridium difficile er en sporedannende anaerob nosokomielle patogener, der er forbundet med mild til livstruende diarré eller colitis (1, 2). C. difficile kolonisering stiger med længden af hospitalsopholdet efter miljøeksponering for sporer eller kontakt med en inficeret person (3). Forurening og overlevelse af C. difficile sporer på hospitalets livløse overflader er blevet rapporteret (4, 5) og vist sig at være forbundet med krydstransmission (6,-8).,
Inaktivering og udryddelse af sporer Clostridium difficile er en udfordring, og flere er relativt nye teknikker er blevet undersøgt, såsom hydrogenperoxid damp, UV-stråling, eller gasformige plasma-systemer (5, 6, 9, 10). Validering af sådanne teknikker bør anvende optimale nyttiggørelsesmetoder til bedre at kvantificere bakteriel sporedræbning eller udryddelse.
en række metoder er blevet brugt til at detektere C. difficile fra hospitalsmiljøet med variable resultater (11, 12). Her rapporterer vi en evaluering af forskellige metoder til at opdage og inddrive C., difficile sporer fra materialer, der ofte findes i hospitalsmiljøet.
(foreløbige data, der stammer fra denne undersøgelse, blev præsenteret som plakat på den europæiske kongres for Klinisk Mikrobiologi og infektionssygdomme, Barcelona, Spanien, maj 2014.)
En C. difficile reference strain, ATCC 700057 (Cruinn Diagnostics, Irland) og et ukarakteriseret klinisk isolat (Diagnostic Laboratory, Beaumont Hospital, Dublin, Irland) blev inkluderet i undersøgelsen. En ændring af C. difficile sport forberedelsesprotokol beskrevet af Chilton et al. blev brugt (13). Kort Fortalt C., difficile blev podet ind forhåndsreduceret brain heart infusion suppleret med gærekstrakt og l-cystein, inkuberet anaerobt ved 37°C i op til 48 h, og spredt på 10 Columbia blod agar plader (Oxoid, det Forenede Kongerige), som blev inkuberet anaerobt ved 37°C i 10 dage (14). Væksten blev opsamlet fra pladerne ved hjælp af en celleskraber og suspenderet i 1 ml fosfatbufret saltvand (PBS)-ethanol (50% ). Suspensionerne blev inkuberet ved stuetemperatur i 1 time med periodisk blanding., Spore suspensioner blev centrifugeret i 10 minutter ved 16.000.g, og pellets blev resuspenderet i 1 ml PBS. Sport tal og renhed blev bestemt ved mikroskopi ved hjælp af Schaeffer og Fulton sport stain kit (Sigma-Aldrich, Irland). 105 CFU / ml (en koloni svarer til en sport), og serielle 1:10 fortyndinger blev fremstillet i PBS.
C., vanskeligt at spore suspensioner (50 µl), der spænder fra 105 til 10 CFU/ml, som blev tilføjet i to eksemplarer til 25 cm2 dele af polyurethan madras stof (Meditec Medicinsk, Irland), polypropylen (GoodFellow Cambridge, Ltd., Det Forenede Kongerige) og rustfrit stål, alle dekontamineret som tidligere beskrevet (15). Sporesuspensioner, der blev påført overfladerne, blev lufttørret over 2 timer. overfladerne blev samplet ved hjælp af præfugtede rayon-vatpinde og nylonflockede vatpinde (Copan, Italien) og anbragt i 3 ml PBS. Serielle fortyndinger af S swabab suspensioner blev inokuleret på præ-poured C. difficile selektive plader-C., difficile agar base CM0601 plus C. difficile supplement SR0096 (250 mg/liter d-cycloserine, 8 mg/liter cefoxitin) og 7% (vol/vol) defibrinated hest blod (SR0050)—leveret af Oxoid til tælling af CFU/ml. Sterile kontaktplader (V .r) blev hældt i laboratoriet med C. difficile selektiv agar og påført hver sektion i 20 s, hvilket sikrer fast kontakt med overfladen. Subcultured plader fra både vaske-og kontakt-plader blev inkuberet natten over anaerobt ved 37°C. Koloni tælling, der blev udført den følgende dag., Detektionsgrænsen (LOD) blev defineret som den laveste koncentration af anvendte sporer, der blev påvist ved en bestemt metode. Alle metoder blev vurderet uafhængigt rettet mod hele sektionen, og deres evner til at opdage og genvinde C. difficile sporer blev sammenlignet. Statistisk analyse blev udført ved hjælp af GraphPad Prism 5.00 soft .are. Midlerne til tre uafhængige eksperimenter med procentdelen af nyttiggørelse for de forskellige metoder blev analyseret ved envejs variansanalyse (ANOVA) og Tukeys multiple-sammenligningstest.,
I 1983 som en af de første rapporter, sammenligning af metoder til genvinding af C. difficile sporer fra en miljømæssig glas overflade viste, at af svaberprøver, selvklæbende pagajer, og kontakt plader, kontakt plader var langt den mest effektive metode, afsløre sporer på et lavt niveau, er enklere at bruge, og relativt hurtigt (16). Siden da er forskellige metoder, herunder svaberprøver, kontaktplader, handsker og svampe, blevet brugt til forskning og udbrudsundersøgelser med variable resultater. Her demonstrerer vi, at kontaktplader opnåede det højeste opsving af C., difficile sporer (14% til 92%) fra forskellige overflader, herunder madrassen materiale, polypropylen, og rustfrit stål, bekræfter og udvide resultaterne fra Buggy et al. (16) til nyttiggørelse fra glas. Opsvinget var også effektiv til strømmede svaberprøver (14% til 76%), og at de mindst effektive metode var rayon podning (7% til 58%) (Fig. 1A og andB).B). Genfindingsprocenten var direkte proportional med størrelsen af det oprindelige inokulum-dvs. et inokulum på 105 CFU/ml tillod kontaktplader at genvinde så meget som 92% og så lidt som 14% for et 10-CFU / ml inokulum., Kontakt plader var også mest følsomme på at afsløre sporer på et minimum inokulum af 10 CFU/ml, mens den LOD, var 102 CFU/ml for strømmede podninger og 103 CFU/ml for rayon podninger, men dette var kun tilfældet for de kliniske isolere. Statistisk set, kontakt plader var bedre end strømmede podninger på polypropylen for den kliniske isolere (P < 0.05) (Tabel 1) og vedholdende overlegen i forhold til rayon svaberprøver (P < 0.05 P < 0.001) (Tabel 1), mens der ikke var nogen signifikant forskel mellem strømmede og rayon podninger., Selvom statistisk analyse ikke afslørede nogen signifikant forskel i genfindingerne mellem alle undersøgte overflader, blev genfindingerne fra madrasmaterialet lidt reduceret sammenlignet med dem fra de to andre overflader. Desuden blev der ikke set nogen statistisk forskel mellem de to isolater.
Procentdel inddrivelse af Clostridium difficile sporer af reference stamme (A) og kliniske isolere (B) fra tre miljømæssige overflader ved hjælp af kontakt-plader, der strømmede podninger, og rayon podninger., Fejlbjælker repræsenterer middelfejlene (sem) fra mindst tre uafhængige eksperimenter (n 3 3).,”1″> S værdi fra statistiske analyse ofa:
C., difficile sporer kan kaste til miljøet af både asymptomatiske og symptomatiske patienter og kan overleve i op til 5 måneder på livløse overflader (17). De modstår de bakteriedræbende virkninger af de fleste hospitalsdesinfektionsmidler og de fleste andre dekontamineringsteknikker (18). Derfor bør interventioner overvåges i værelser, der i øjeblikket eller tidligere er besat af C. difficile-luftfartsselskaber. Rapporteringen af forbedrede metoder med hensyn til hastighed og følsomhed, såsom kontaktpladen og flockede vatpinde rapporteret her, giver et mere præcist skøn over C., difficile byrde sammenlignet med tidligere rapporterede metoder. I betragtning af, at C. difficile er den mest fremtrædende endospore i dagens sundhedsvæsen omgivelser og udgør en betydelig smitterisiko for sårbare patienter, og der er et voksende behov for at præcist at kvantificere C. difficile spore forurening i sundhedssektoren. Dette ville være med henblik på at vurdere nye metoder til dekontaminering og korrelere niveauet af miljøforurening med risikoen for infektion og forekomsten af udbrud., Ikke desto mindre er forbedring af accepterede gendannelsesmetoder ved hjælp af materialer, der repræsenterer dem, der findes i hospitalsindstillingen, en nødvendig forudsætning.