Af CPR Louisville på juli 1, 2014 | 6:06 pm | Udskriv
UKENDT LAB RAPPORT
Ukendt Antal 105
Michelle Sinovcic
BIO 203: Almen Mikrobiologi jeg
Forår 2014
INDLEDNING
Kortlægning og forståelse af mikroorganismer, der er vigtig af flere grunde er, at bakterier er en væsentlig årsag til menneskers sygdom og sygdom., At kunne helbrede flere infektioner og sygdomme kan gøres ved at være velinformeret om forskellige mikroorganismer og hvordan de virker i forskellige miljøer. Denne undersøgelse af identifikation af ukendte bakterier blev udført ved hjælp af forskellige teknikker anvendt i mikrobiologilaboratorieklassen indtil dette punkt.
materialer og metoder
et reagensglas af bouillon indeholdende ukendte bakterier mærket med nummeret 105 blev modtaget fra mikrobiologilaboratorieprofessoren. En række procedurer lært i mikrobiologi lab klasse blev udført på de ukendte bakterier., Disse tests blev udført som anvist i microbiology course lab manual af Mcdonald, Thoele, Salsgiver og Gero (1), medmindre andet er angivet.
den første metode, der kræves, var quadrantuadrant streak-metoden. Dette blev gjort for at isolere de to ukendte bakterier på en næringsstofagarplade ved hjælp af en inokuleringssløjfe, bunsenbrænder og bouillon. Inkubation af denne plade ved stuetemperatur blev derefter Udført for at forsøge bestemmelse af to separate kolonier., Vækst fra en koloni på denne plade blev derefter testet for Gram svar gennem de nødvendige trin i gram farvning ved hjælp af jod, krystal violet, alkohol, og safranin for at finde en enkelt type bakterie. Observation under et mikroskop genavealed gram respons af bakterien fra kolonien. Opført i tabel 1 er de anvendte procedurer, anvendte materialer, inkubationstemperatur og deres registrerede resultater for den første bakterie. Inkluderet i disse tests er Citrat, Glucose og Lactose fermentering, svovl reduktion gennem en Kligler jern test, urinstof test, og Methyl Rød test.,
nødvendige skridt blev derefter taget for at udføre en Simmon ‘ s Citrat test på den første bakteriekoloni under anvendelse af en inokulerende sløjfe steriliseret af flammen af en bunsenbrænder for at sætte vækst på den grønne agar skrå. Inkubation af dette rør blev derefter gjort i fem dage i en 35 setting C indstilling. Bestemmelse af bakteriens anvendelse af citrat som sin eneste kilde til kulstof var årsagen til denne test.
en Kligler jern test blev udført under anvendelse af vækst fra den første koloni for at indsnævre muligheder for den mulige bakterie ved at bestemme dens fermenteringsevne for Glucose og Lactose., Mediet blev stukket af en flammesteriliseret inokuleringsnål med bakterievækst på den og inkuberet ved 35.C i fem dage.
en urinstof test var den næste test afsluttet på denne gram-negative koloni. Dette blev gjort ved at omrøre nogle af bakterien i pH-indikatoren phenolrød og urinstofmedium flamme steriliseret inokuleringssløjfe. Det blev derefter inkuberet i en 35 setting C indstilling i otteogfyrre timer. At opdage, om bakterien kunne producere en syre eller ej, var formålet med denne test., En Methylrød test blev også udført på de gram-negative bakterier for at bestemme, om bakterien producerede syre efter fermentering af glukose. En flammesteriliseret inokuleringssløjfe med bakterievækst på den blev omrørt omkring røret af proteinet og glucose MR-VP-mediet og inkuberet ved 35.C i otteogfyrre timer. Disse tests blev udført for at bekræfte det endelige resultat af den ukendte gram-negative bakterie.
en anden næringsstofagarplade blev stribet i forsøget på at finde et sekund af bakterier., Den anden metode, der var nødvendig for at isolere den anden bakterie, specifikt en gram-positiv bakterie, blev udført ved hjælp af en inokuleringssløjfe steriliseret af en Bunsenbrænderflamme for at sprede bouillon fra det originale rør på en mannitolsalt agarplade, som blev inkuberet ved 35.C i fire dage. Efter ingen vækst optrådte en isoleret gram-positiv bakterievækst på en skråning i et reagensglas mærket Alt 8 blev derefter modtaget fra laboratorieinstruktøren. Test blev derefter udført på det., I tabel 2 er de udførte tests, anvendte materialer, inkubationstemperatur og deres registrerede resultater for den anden bakterie. Casein test og en Matlose test blev udført.
den første procedure, der kræves til denne vækst, var en gram-plet. Der blev anvendt krystalviolet, jod, alkohol og safranin. Bakteriens gram-respons blev testet for at indsnævre valg for, hvad dette ukendte kan være.
en kaseintest var den næste procedure, der blev udført på den gram-positive bakterie for at bestemme, om bakterien kunne producere en .ymet casease., En inokulerende sløjfe blev flammesteriliseret, dækket med en vis bakterievækst og spredt på en mælk agarplade. Inkubation af denne plade blev udført i en 35 setting C indstilling i fem dage.
en maltosetest var den næste metode, der blev brugt til at bekræfte identiteten af den ukendte bakterie. Det ville afgøre, om bakterien kunne producere syre fra maltosefermentering. En flammesteriliseret inokuleringssløjfe med bakterievækst blev omrørt omkring mediet. Røret blev derefter inkuberet ved 35 C C i fem dage.,
resultater
inkluderet i tabel 1 er de udførte tests, anvendte materialer, inkubationstemperaturer og resultaterne fra den gram-negative bakterie, tabel 2 viser disse for de gram-positive. Inkluderet i Flo .chart 1 er testene og deres resultater for den gram-negative bakterie, Flo .chart 2 viser disse for den gram-positive.,d=”5fa084a25a”>Maltose-test
DISKUSSION / KONKLUSION
De forskellige prøver fra de mikrobiologiske laboratorium klasse manual, der blev udført på både gram-negative og gram-positive bakterier, er, hvad der førte til deres identitet., Det første skridt, der blev taget, var at isolere bakterien fra original bouillon #105 i to separate kolonier ved hjælp af kvadrantstreak-metoden på en næringsstofagarplade.
efter at lade den første stribe plade inkubere ved stuetemperatur i fem dage var der vækst på de to første striber, men de sidste to havde ingen. Denne vækst bestod kun af en særskilt koloni, en anden var ikke til stede. Dette førte derefter til gram farvning af denne koloni, en anden stribe plade på næringsstof agar i et forsøg på at dyrke den nødvendige anden koloni, og brugen af en Mannitol Salt Agar plade.,
når man observerede det gram-farvede lysbillede af den første koloni under mikroskopet, blev der set lyserøde coccobaciller. At se disse næsten runde stænger viste, at dette var en gram-negativ bakteriekoloni. Da alle de gram-negative muligheder var stænger, indsnævrede dette ikke nogen af mulighederne.
at vide, at den gram-negative bakterie voksede, blev kvadrantstreak-metoden igen brugt på en næringsstofagarplade i håb om også at dyrke den gram-positive bakterie., Også ved hjælp af bouillon fra # 105-røret blev en Mannitol Salt agarplade belagt, idet den vælger til gram-positiv bakterievækst. Når man kontrollerede resultaterne efter inkubation, var der ingen vækst på denne plade, og stadig ingen anden særskilt koloni. En isoleret gram-positiv bakterie mærket Alt 108 blev derefter givet.
den første test udført på den gramnegative koloni var en citrattest ved anvendelse af en skråning af green Simmon ‘ s Citratagar inokuleret ved at sætte vækst på toppen af skråningen. Efter inkubation havde skrå vendt en blå farve, hvilket resulterede i en positiv test., Dette viste, at bakterien bruger citrat som sin primære carbonkilde. Dette udelukkede også Escherichia coli som en mulighed for min gram-negative bakterie. Den næste test var Kligler jern test.
Kligler jern test bestod af stikkende en skrå for at teste for reduktion af svovl, fermentering af glucose, og fermentering af lactose. Efter inkubering havde toppen af skråningen vendt en rød farve, og bunden var gul. Disse resultater viste et negativt resultat for hydrogensulfid, da der ikke var nogen sort i røret, hvilket betød, at Proteus vulgaris ikke længere var en mulighed., Den røde farve og den gule bund viste begge den positive glukosefermentering, der udelukkede Pseudomonas aeruginosa. Både Proteus vulgaris og Pseudomonas aeuginosa blev udelukket af det negative lactoseresultat. Den næste anvendte metode var en Urinstofprøve.
denne test bestod i omrøring af bakterievæksten i et rør af phenolrød og urinstof for at teste for tilstedeværelsen af syre. Efter inkubation var bouillon stadig en gul farve, hvilket gav et negativt resultat. Dette bekræftede, at Enterobacter aerogenes var den gram-negative bakterie. En Methylrød test blev også udført for at bekræfte dette svar.,
bakterievæksten blev omrørt i MR-VP og protein bouillon for at bestemme, om syre kunne produceres som et resultat af glucosefermentering. Efter inkubation var bouillon en gul farve; et negativt resultat. Dette bekræftede også, at den ukendte bakterie var Enterobacter aerogenes.
den første test udført på den gram-positive vækst var en gram-plet. Efter at have udført proceduren, der involverede krystalviolet, jod, alkohol, og safranin, og visning af diaset under mikroskopet, lilla stænger blev set., Formen er stænger indsnævret mulighederne for Bacillus cereus og Bacillus subtilis. Den næste test udført på denne vækst var en kasein test.
bakterievækst blev spredt på en mælk agar plade for at se, om bakterien produceret casease og nedbryde kasein. Efter inkubation havde pladen hvid vækst på den, hvilket gav et negativt resultat. Dette negative resultat gjorde det muligt at udelukke muligheden forbacillus cereus. Dette betød en bekræftelse af, at den gram-positive bakterie var Bacillus subtilis. For at få en anden bekræftelse blev der udført en maltose test.,
bakterievækst blev omrørt til et rør indeholdende et rødt maltosemedium for at teste for syre som et resultat af maltosefermentering. Efter inkubation var væsken en gul farve, hvilket gav et positivt resultat for syreproduktion. Dette resultat bekræftede bakterien som værende Bacillus cereus. Dette var et modsat resultat, end kaseintesten havde vist.
efter at have talt med laboratorieprofessoren om resultaterne, blev kaseintesten bekræftet som at have sande resultater. Den ukendte gram-positive bakterie blev konfimeret som værende Bacillus cereus, og den gram-negative er Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes er ofte set som værende årsag til nedre luftvejsinfektioner, hud og blødt væv infektioner, urinvejsinfektioner (Uvi), endocarditis, intra-abdominale infektioner, septisk artrit, osteomyelitis, CNS infektioner, og oftalmologiske infektioner. (2) et problem med Enterobacter infektioner er, at de ofte ikke kan differentieres fra andre akutte bakterielle infektioner.
single-agent antimocribal terapi anvendes typisk i tilfælde af Enterobacter infektioner., (3) Beta-lactamer, aminoglycosider, Fluro .uinoloner og Trithomprim-sulfametho .a .on (tmp-SM.) er alle antibiotika, der bruges regelmæssigt til behandling af disse typer infektioner. (2) et problem med dette er, at når man får for meget eksponering for disse lægemidler, udvikles resistens ofte, hvilket i øjeblikket har vist et stort problem med disse infektioner. På grund af disse modstande bruges kombination af antibiotika med forskellige strukturer nu som behandling for infektioner, kombinationsterapi.Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver og Susie Gero. Lab Manual for generel mikrobiologi., N. p.: n.p., 2011. Udskrive.