PMC (Čeština)

TEXT

Clostridium difficile je sportovní anaerobní nozokomiální patogen spojený s mírným až život ohrožujícím průjmem nebo kolitidou (1, 2). C. difficile kolonizace se zvyšuje s délkou pobytu v nemocnici po expozici životního prostředí sporům nebo kontaktu s infikovanou osobou (3). Byla hlášena kontaminace a přežití spór C. difficile na neživých površích v nemocnici (4, 5) a ukázalo se,že jsou spojeny s křížovým přenosem (6, -8).,

inaktivace a eradikace spór Clostridium difficile jsou výzvou a bylo zkoumáno několik relativně nových technik, jako jsou páry peroxidu vodíku, UV záření nebo plynné plazmatické systémy (5, 6, 9, 10). Validace těchto technik by měla používat optimální metody obnovy pro lepší kvantifikaci zabíjení nebo eradikace bakteriálních spór.

různé metody byly použity k detekci C. difficile z nemocničního prostředí s variabilními výsledky (11, 12). Zde uvádíme hodnocení různých metod pro detekci a obnovu C., difficile spory z materiálů běžně nalezených v nemocničním prostředí.

(předběžné údaje vyplývající z této studie byly prezentovány jako plakát na Evropském kongresu klinické mikrobiologie a infekčních nemocí v Barceloně, Španělsko, Květen 2014.)

C. difficile referenční kmen ATCC 700057 (Cruinn Diagnostika, Irsko), a jeden uncharacterized klinického izolátu (Diagnostické Laboratoře, Beaumont Hospital, Dublin, Irsko) byly zahrnuty do studie. Modifikace C. difficile spore preparation protocol popsané Chilton et al. byl použit (13). Krátce, C., difficile byl naočkován do prereduced mozkosrdcová infuze doplněna kvasničného extraktu a l-cystein, inkubovány anaerobně při 37°C po dobu 48 h, a šíří na 10 Columbia krevní agar desky (Oxoid, Velká Británie), které byly inkubovány anaerobně při 37°C po dobu 10 dnů (14). Růst byl odebrán z desek pomocí buněčné škrabky a suspendován v 1 ml fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem (PBS) – ethanolu (50%). Suspenze byly inkubovány při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny s periodickým mícháním., Suspenze spór byly centrifugovány po dobu 10 minut při 16 000 × g a pelety byly resuspendovány v 1 ml PBS. Sportovní čísla a čistota byly stanoveny mikroskopií pomocí Schaeffer a Fulton sportovní skvrna kit (Sigma-Aldrich, Irsko). Suspenze byly upraveny na koncentraci přibližně 105 CFU / ml (jedna kolonie je ekvivalentní jedné sportovní), a sériové 1:10 ředění byly připraveny v PBS.

C., difficile sportovní suspenze (50 µl), v rozmezí od 105 do 10 CFU/ml, byly přidány ve dvou vyhotoveních na 25 cm2 úseky polyuretanové matrace tkaniny (Meditec Medical, Irsko), polypropylen (GoodFellow Cambridge, Ltd., Spojené království) a nerezová ocel, všechny dekontaminované, jak bylo popsáno výše (15). Spore suspenze se aplikuje na povrchy, které byly sušeny na vzduchu více než 2 h. Povrchy byly odebrány pomocí premoistened rayon tampony a nylon hrnuli tampony (Copan, Itálie) a umístěn ve 3 ml PBS. Sériová ředění tamponových suspenzí byla naočkována na předem připravené selektivní destičky C. difficile-C., difficile agar base CM0601 plus c. difficile supplement SR0096 (250 mg/litr d-cykloserinu, 8 mg/litr cefoxitinu) a 7% (vol/vol) defibrinovaná koňská krev (SR0050)—poskytuje Oxoid pro výčet CFU/ml. Sterilní kontaktní desky (VWR) byly nality do laboratoře selektivním agarem C.difficile a aplikovány na každou sekci po dobu 20 s, což zajišťuje pevný kontakt s povrchem. Subkulturované desky z obou tamponů a kontaktních desek byly inkubovány přes noc anaerobně při 37°C.následující den byl proveden výčet kolonií., Limit detekce (LOD) byl definován jako nejnižší koncentrace aplikovaných spór, která byla detekována specifickou metodou. Všechny metody byly hodnoceny nezávisle zaměřené na celou sekci a byly porovnány jejich schopnosti detekovat a obnovit spory C.difficile. Statistická analýza byla provedena pomocí softwaru GraphPad Prism 5.00. Prostředky tří nezávislých experimentů procenta zotavení pro různé metody byly analyzovány jednosměrnou analýzou rozptylu (ANOVA) a Tukeyho vícenásobným srovnávacím testem.,

v roce 1983 jedna z prvních zpráv porovnávajících metody obnovy spór C.difficile z povrchu ekologického skla ukázala, že tampony, lepicí pádla a kontaktní desky byly kontaktní desky zdaleka nejúčinnější metodou, detekce spór na nízkých úrovních, jednodušší použití a relativně rychlé (16). Od té doby byly pro výzkum a vyšetřování ohniska s variabilními výsledky použity různé metody, včetně tamponů, kontaktních desek, rukavic a hub. Zde demonstrujeme, že kontaktní desky dosáhly nejvyššího zotavení C., spory difficile (14% až 92%) z různých povrchů, včetně materiálu matrace, polypropylenu a nerezové oceli, potvrzující a rozšiřující výsledky z Buggy et al. (16) pro obnovu ze skla. Obnova byla také účinná u flocked tamponů (14% až 76%) a nejméně účinnou metodou byl rayonový tampon (7% až 58%) (obr. 1A a andB).B). Oživení procento bylo přímo úměrné velikosti počáteční inokulum—tj. inokula 105 CFU/ml dovoleno kontakt desky obnovit, stejně jako 92% a tak málo, jak je 14% pro 10 CFU/ml inokula., Kontaktní desky jsou také nejvíce citlivé na detekci plísní na minimum inokula 10 CFU/ml, zatímco LOD byla 102 CFU/ml pro hrnuli tampony a 103 CFU/ml pro rayon tampony, ale to platilo pouze pro klinické izolovat. Statisticky, kontaktujte desky byly lepší, než se hrnuli tampony na polypropylenu pro klinický izolát (P < 0.05) (Tabulka 1) a trvale vynikající na hedvábí tampony (P < 0,05 P < 0.001) (Tabulka 1), zatímco tam byl žádný významný rozdíl mezi hrnuli a hedvábí tampony., I když statistická analýza neodhalila žádné významné rozdíly ve výtěžnosti mezi všechny povrchy studoval, zotavení se z matrace materiál byly mírně sníženy v porovnání s těmi od ostatních dvou ploch. Kromě toho nebyl mezi těmito dvěma izoláty pozorován žádný statistický rozdíl.