CPR Louisville v červenci 1, 2014 | 6:06 pm | Print
UNKNOWN LAB REPORT
Unknown Number 105
Michelle sinovcic
bio 203: obecná mikrobiologie i
jaro 2014
úvod
identifikace a porozumění mikroorganismům je důležité z mnoha důvodů, že bakterie jsou hlavní příčinou lidských nemocí a nemocí., Schopnost léčit více infekcí a nemocí může být provedena tím, že je dobře informována o různých mikroorganismech a o tom, jak fungují v různých prostředích. Tato studie identifikace neznámých bakterií byla provedena pomocí různých technik používaných v mikrobiologické laboratorní třídě až do tohoto bodu.
materiály a metody
od profesora mikrobiologické laboratoře byla přijata zkumavka vývaru obsahující neznámé bakterie označené číslem 105. Na neznámých bakteriích byly provedeny různé postupy získané v mikrobiologické laboratorní třídě., Tyto testy byly provedeny podle pokynů v příručce mikrobiologického kurzu Mcdonald, Thoele, Salsgiver a Gero (1), pokud není uvedeno jinak.
první požadovanou metodou byla metoda kvadrantu. To bylo provedeno za účelem izolace dvou neznámých bakterií na živné agarové desce pomocí inokulační smyčky, Bunsenova hořáku a vývaru. Inkubace této desky při pokojové teplotě byla poté provedena za účelem pokusu o stanovení dvou samostatných kolonií., Růst z kolonie na této desce byl poté testován na jeho gramovou odpověď prostřednictvím kroků gramového barvení pomocí jódu, krystalové fialky, alkoholu a safraninu, aby se našel jeden typ bakterie. Pozorování pod mikroskopem obnovilo gramovou reakci bakterie z kolonie. V tabulce 1 jsou uvedeny postupy, použité materiály, teplota inkubace a jejich zaznamenané výsledky pro první bakterii. Zahrnuty v těchto testech jsou citrát, glukóza a laktóza fermentace, redukce síry prostřednictvím Kligler testu železa, močoviny test, a Methylčervený test.,
poté byly podniknuty nezbytné kroky k provedení Simmonova citrátového testu na první bakteriální kolonii pomocí inokulační smyčky sterilizované plamenem Bunsenova hořáku, aby se růst dostal na zelený agarový sklon. Inkubace této trubice byla poté provedena po dobu pěti dnů v nastavení 35 ° C. Stanovení použití citrátu jako jediného zdroje uhlíku bakterií bylo důvodem tohoto testu.
pomocí růstu z první kolonie byl proveden Kleglerův test železa, aby se zúžily možnosti možné bakterie určením jejích fermentačních schopností glukózy a laktózy., Médium bylo bodnuto plamenem sterilizovanou inokulační jehlou s bakteriálním růstem a inkubováno při 35°C po dobu pěti dnů.
močovinový test byl dalším testem dokončeným na této gramnegativní kolonii. To bylo provedeno mícháním některých bakterií do indikátoru pH fenol červená a močovina střední plamen sterilizované inokulační smyčky. Poté byl inkubován v prostředí 35°C po dobu čtyřiceti osmi hodin. Zjištění, zda by bakterie mohla produkovat kyselinu, bylo účelem tohoto testu., Na gramnegativních bakteriích byl také proveden test na Methyl-červenou barvu, aby se zjistilo, zda bakterie produkovala kyselinu po fermentaci glukózy. Plamen sterilizované očkovat smyčky s bakteriální růst na to se míchá kolem trubice proteinu a glukózy, MR-VP střední a inkubovány při 35°C po dobu čtyřiceti osmi hodin. Tyto testy byly provedeny za účelem potvrzení konečného výsledku neznámé gramnegativní bakterie.
při pokusu o nalezení sekundy bakterií byla pruhována druhá živná agarová deska., Druhá metoda potřebná k izolaci druhé bakterie, konkrétně gram-pozitivní bakterie, byla provedena pomocí inokulační smyčky sterilizované plamenem hořáku Bunsen, aby se rozšířil vývar z původní zkumavky na agarovou desku mannitol salt agar, která byla inkubována při teplotě 35°C po dobu čtyř dnů. Poté, co se neobjevil žádný růst, byl od laboratorního instruktora přijat izolovaný gram-pozitivní bakteriální růst na sklonu ve zkumavce označené Alt 8. Poté byly provedeny testy., V tabulce 2 jsou uvedeny provedené testy, použité materiály, teplota inkubace a jejich zaznamenané výsledky pro druhou bakterii. Byl proveden test kaseinu a test Matlose.
první postup potřebný pro tento růst byl gram skvrna. Byla použita krystalová fialová, jód, alkohol a safranin. Gramová odpověď bakterie byla testována, aby se zúžily možnosti, jaké to může být neznámé.
kasein test byl další postup provádí na gram-pozitivní bakterie k určení, zda bakterie by mohla produkovat enzym casease., Naočkovaná smyčka byla sterilizována plamenem, pokrytá nějakým bakteriálním růstem a rozložena na mléčnou agarovou desku. Inkubace této desky byla provedena v nastavení 35°C po dobu pěti dnů.
maltózový test byl další metodou používanou k potvrzení identity neznámé bakterie. Určilo by se, zda by bakterie mohla produkovat kyselinu z maltózové fermentace. Kolem média se míchala plamen sterilizovaná inokulační smyčka s bakteriálním růstem. Trubka byla poté inkubována při teplotě 35 ° C po dobu pěti dnů.,
VÝSLEDKY
uvedené v Tabulce 1 jsou testy prováděny, použité materiály, teploty inkubace, a výsledky z gram-negativní bakterie, Tabulka 2 ukazuje tyto pro gram-pozitivní. Součástí vývojového diagramu 1 jsou testy a jejich výsledky pro gramnegativní bakterie, vývojový diagram 2 ukazuje tyto pro gram-pozitivní.,D=“5fa084a25a“>
maltózový test
diskuse / závěr
různé testy z příručky třídy mikrobiologie Lab, které byly provedeny jak na gramnegativních, tak na grampozitivních bakteriích, vedly k jejich identitě., Prvním krokem byla izolace bakterie z původního vývaru #105 do dvou samostatných kolonií pomocí metody kvadrant streak na živné agarové desce.
Po vypuštění první série destičku inkubujte při pokojové teplotě po dobu pěti dní byl růst v prvním dvěma pruhy, ale poslední dva měli žádný. Tento růst se skládal pouze z jedné odlišné kolonie, druhá nebyla přítomna. To pak vedlo k gram barvení kolonie, druhý pruh plechu na živném agaru ve snaze pěstovat potřebné druhé kolonie, a použití Mannitol Salt Agar plate.,
při pozorování gram obarveného snímku první kolonie pod mikroskopem byly vidět růžové coccobacilli. Vidět tyto téměř kulaté pruty dokázalo, že se jedná o gramnegativní bakteriální kolonii. Vzhledem k tomu, že všechny gramnegativní možnosti byly pruty, to nezmenšilo žádnou z možností.
s Vědomím, že gram-negativní bakterie rostly, kvadrant série metoda byla použita opět na živném agaru desky v naději, že rostoucí gram-pozitivní bakterie stejně., Také pomocí vývar z # 105 trubice, mannitol sůl Agar deska byla potažena tím, že vybírá pro gram-pozitivní bakteriální růst. Při kontrole výsledků po inkubaci nebyl na této desce žádný růst a stále žádná druhá výrazná kolonie. Poté byla podána izolovaná grampozitivní bakterie označená Alt 108.
první test na gram-negativní kolonie byla citrát test pomocí šikmé zelené Karel je Citrátového agaru inokulovaném tím, že růst na vrcholu šikmo. Po inkubaci se sklon změnil na modrou barvu, což vedlo k pozitivnímu testu., To ukázalo, že bakterie používá citrát jako primární zdroj uhlíku. To také vyloučilo Escherichia coli jako možnost mé gramnegativní bakterie. Dalším testem byl Klegler Iron test.
test na železo Kligler spočíval v bodnutí sklonu, aby se testovalo na snížení síry, fermentaci glukózy a fermentaci laktózy. Po inkubaci se horní část sklonu změnila na červenou barvu a dno bylo žluté. Tyto výsledky ukázaly negativní výsledek pro sirovodík, protože v trubici nebyla žádná černá, což znamenalo, že Proteus vulgaris již nebyl volbou., Červená barva a žluté dno ukázaly pozitivní fermentaci glukózy, která vyloučila Pseudomonas aeruginosa. Jak Proteus vulgaris, tak Pseudomonas aeuginosa byly vyloučeny negativním výsledkem laktózy. Další použitou metodou byl test močoviny.
tento test spočíval v míchání bakteriálního růstu do zkumavky fenolově červené a močoviny za účelem testování přítomnosti kyseliny. Po inkubaci byl vývar stále žlutý, což mělo negativní výsledek. To potvrdilo, že Enterobacter aerogenes byla gramnegativní bakterie. Pro potvrzení této odpovědi byl také proveden test na Methyl-červenou barvu.,
bakteriální růst byl míchán do Mr-VP a proteinového vývaru, aby se zjistilo, zda by kyselina mohla být produkována v důsledku fermentace glukózy. Po inkubaci byl vývar žluté barvy; negativní výsledek. To také potvrdilo, že neznámá bakterie byla Enterobacter aerogenes.
první test provedený na gram-pozitivním růstu byl gram skvrna. Po provedení procedury zahrnující krystalovou fialku, jód, alkohol a safranin a prohlížení snímku pod mikroskopem byly vidět fialové tyče., Tvar tyče zúžil možnosti Bacillus cereus a Bacillus subtilis. Dalším testem provedeným na tomto růstu byl kaseinový test.
Bakteriální růst byl rozšířen na mléko agarové plotny, aby bylo vidět, jestli bakterie vyrábí casease a štěpí kasein. Po inkubaci měla deska bílý růst, což mělo negativní výsledek. Tento negativní výsledek umožnil vyloučit možnostbacillus cereus. To znamenalo potvrzení, že grampozitivní bakterií je Bacillus subtilis. Za účelem získání druhého potvrzení byl proveden maltózový test.,
bakteriální růst byl míchán do zkumavky obsahující červené maltózové médium pro testování kyseliny v důsledku fermentace maltózy. Po inkubaci byla kapalina žlutá, což mělo pozitivní výsledek pro produkci kyseliny. Tento výsledek potvrdil bakterii jako Bacillus cereus. Byl to opačný výsledek, než ukázal kaseinový test.
po rozhovoru s profesorem laboratoře o výsledcích byl test kaseinu potvrzen jako skutečný výsledek. Neznámá gram-pozitivní bakterie byla konfimována jako Bacillus cereus a gramnegativní je Enterobacter aerogenes.,
Enterobacter aerogenes je běžně považován za příčinu infekcí dolních cest dýchacích, infekcí kůže a měkkých tkání, infekcí močových cest (UTI), endokarditidy, intraabdominálních infekcí, septické artritidy, osteomyelitidy, infekcí CNS a očních infekcí. (2) Jedním z problémů s infekcemi Enterobacter je to, že je často nelze odlišit od jiných akutních bakteriálních infekcí.
Antimokribální terapie s jedním činidlem se obvykle používá v případech Enterobacter infekcí., (3) Beta-laktamy, aminoglykosidy, Flurochinolony a Trithomprim-sulfamethoxazon (TMP-SMZ) jsou všechna antibiotika používaná pravidelně k léčbě těchto typů infekcí. (2) Problém s tím spočívá v tom, že při přílišném vystavení těmto lékům se často vyvíjí rezistence, která v současné době vykazuje velký problém s těmito infekcemi. Díky těmto odporům se nyní kombinuje antibiotika s různými strukturami jako léčba infekcí, kombinovaná terapie.
Mcdonald, Victoria, Mary Thoele, Bill Salsgiver a Susie Gero. Laboratorní Příručka pro obecnou mikrobiologii., Pozn.: Pozn., 2011. Tisek.